doi: 10.15389/agrobiology.2023.4.745rus
УДК 636.934.55:591.2
Исследование выполнено в рамка государственных заданий Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (проекты № 0721-2020-00190 и № FGUG-2022-0009) и при поддержке гранта РФФИ 20‐04‐60010 «Изучение разнообразия, циркуляции и патогенного потенциала коронавирусов в природных резервуарах на территории Западной и Восточной Сибири».
РОЛЬ ГРИБОВ В ЭТИОЛОГИИ МАССОВЫХ КОЖНЫХ ПОРАЖЕНИЙ У СОБОЛЯ Martes zibellina L. 1758 В ТОМСКОЙ ОБЛАСТИ
Р.С. ОВЧИННИКОВ1 ✉, А.В. ЖИГАЛИН2, 3, А.Г. ГАЙНУЛЛИНА1,
А.Г. ЮЖАКОВ1, О.Ю. ТЮТЕНЬКОВ2, В.А. САВИНОВ1,
Н.С. МОСКВИТИНА2, А.В. КАПУСТИН1, А.И. ЛАИШЕВЦЕВ1,
А.М. ГУЛЮКИН1
Массовые кожные заболевания у промысловых соболей (Marteszibellina L. 1758) на территории Сибири известны с XVIII века, однако их этиология до сих пор недостаточно изучена. Заболевание поражает до 62 % промысловых соболей, вызывая повреждения кожного покрова, и наносит серьезный экономический ущерб. В настоящей работе впервые установлено, что в этиологии кожного заболевания соболей участвуют кератинофильные грибы-дерматофиты различных видов, часть из которых впервые обнаружена на территории Российской Федерации. Целью работы было выявление и идентификация клинически значимых микроскопических грибов у соболей с проявлениями кожных заболеваний. Патологический материал (волосы, корочки), отбирали с пораженных участков шкур диких соболей (Martes zibellina), добытых при пушном промысле сезона 2018-2019 годов в разных районах Томской области. Всего было изучено 28 образцов патологического материала. Микологическое исследование включало тест с лампой Вуда, прямую микроскопию патологического материала, посев на микологические среды с последующей идентификацией выделенных культур грибов. Посев проводили на дифференциально-диагностическую среду для дерматофитов ДТМ-Эксперт (ФНЦ ВИЭВ РАН, Россия) и на среду Сабуро с хлорамфениколом («HiMedia Laboratories Pvt. Ltd.», Индия). Посевы инкубировали в аэробных условиях при 26-28 °С, срок инкубирования — до 21 сут. Для изучения культурально-морфологических признаков делали пересев культур уколом на агар Сабуро в чашках Петри, инкубировали 10-14 сут. Для молекулярно-генетической идентификации отбирали изолированные колонии грибов, выращенных на среде Сабуро в течение 10 сут при 26-28 °С. ДНК выделяли с помощью набора GeneJET Plant Genomic DNA Purification Kit («Thermo Fisher Scientific», США) в соответствии с инструкцией изготовителя. Полученную ДНК использовали для проведения полимеразной цепной реакции (ПЦР). Секвенировали участки внутреннего транскрибируемого спейсера гена рибосомальной РНК (ITS). Филогенетический анализ полученных нуклеотидных последовательностей проводили с помощью приложения SeqMan (DNASTAR Lasergene v.7.1.0, https://www.dnastar.com/software/lasergene/). Выравнивание последовательностей с имеющимися в базе данных GenBank выполняли с использованием пакета программ Standard Nucleotide BLAST (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). Нуклеотидные последовательности, представляющие особый интерес, депонированы в базе данных GenBank NCBI. При осмотре шкур соболей были обнаружены кожные поражения, которые локализовались в основном в области спины, поясницы, боков и характеризовались выпадением остевых волос, алопециями, образованием корочек и струпьев. Часто в области поражений со стороны мездры имелись темные пятна. Поражения наблюдали как у самцов, так и у самок, преимущественно у молодняка. Образцы патологического материала представляли собой слипшиеся пучки волос (пуховые, реже остевые) с засохшими корочками и чешуйками у основания. Результат люминесцентного теста с лампой Вуда во всех образцах был отрицательным. При микроскопии наблюдали пучки слипшихся пуховых волос и большое количество гнойного дебриса, затрудняющего обнаружение грибных элементов. В результате культурального микологического анализа была выделена 51 культура, идентифицировано 18 таксонов (видов и родов) грибов. При этом из 12 % образцов были изолированы кератинофильные грибы-дерматофиты (Arthrodermacuniculi, Chrysosporium carmichaelii, Chrysosporium spp.), вероятно, выступающие в качестве этиологических агентов дерматоза. Рост дерматофитов наблюдался только на селективной дифференциально-диагностической среде ДТМ-Эксперт, на обычных средах росли быстрорастущие недерматофитные грибы. Также были изолированы недерматофитные грибы с кератинолитическим свойствами — Scopulariopsisbrevicaulis (16 %), Acremonium spp. (14 %), Aspergillus spp. (36 %), которые могут выступать в качестве вторичных оппортунистических патогенов.
Ключевые слова: патогенные грибы, микозы животных, дерматомикозы, дерматофиты, Arthroderma, Chrysosporium, соболь, Marteszibellina.
R.S. Ovchinnikov1 ✉, A.V. Zhigalin2, 3, A.G. Gaynullina1,
A.G. Yuzhakov1, O.Yu. Tutenkov2, V.A. Savinov1,
N.S. Moskvitina2, A.V. Kapustin1, A.I. Laishevtcev1, A.M. Gulykin1
Mass skin lesions in sables Martes zibellina in Siberia have been known since the 18th century, but their etiology is still not well understood. The disease affects up to 62 % of hunted sables, causing damage to the skin and causing serious economic loss. One of the versions suggests the participation of microscopic fungi in the occurrence of this dermatosis. In the present work, it was established for the first time that keratinophilic dermatophyte fungi of various species are involved in the etiology of skin disease in sables, some of which were discovered in the territory of the Russian Federation for the first time. The aim of the work was to reveal and identify clinically significant fungi in sables with clinical manifestations of skin diseases. Pathological material (hair, crusts) was taken from the affected areas of the skins of wild sables (Martes zibellina L. 1758), hunted during the 2018-2019 hunting season in various areas of the Tomsk region. A total of 28 samples of pathological material were studied. Mycological examination included a Wood's lamp test, direct microscopy of the pathological material, inoculation on mycological media, followed by identification of isolated fungal cultures. Inoculation was performed on DTM-Expert, a differential diagnostic medium for dermatophytes (FNTs VIEV RAS, Russia) and on Sabouraud medium with chloramphenicol (HiMedia Laboratories Pvt. Ltd., India). The incubation was carried out under aerobic conditions at 26-28 °C, the incubation period was up to 21 days. To study the cultural and morphological features, the cultures were re-inoculated on Sabouraud agar in Petri dishes, incubated for 10-14 days. For molecular genetic identification, isolated colonies of fungi grown on Sabouraud’s medium were selected for 10 days at 26-28 °C. DNA was isolated using the GeneJET Plant Genomic DNA Purification Kit (Thermo Fisher Scientific, USA) according to the manufacturer's instructions. The resulting DNA was used to carry out the polymerase chain reaction (PCR). Regions of the internal transcribed spacer (ITS) of the ribosomal RNA gene were sequenced. Phylogenetic analysis of the obtained nucleotide sequences was performed using the SeqMan application (DNASTAR Lasergene v.7.1.0, https://www.dnastar.com/software/laser-gene/). Sequence alignment with those available in the GenBank database was performed using the Standard Nucleotide BLAST software package (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/). The resulting nucleotide sequences of particular interest were deposited to the GenBank NCBI database. When examining the affected sables, skin lesions were found, which were localized mainly in the back, waist, and sides. They were characterized by loss of guard hairs, alopecia, formation of crusts and scabs. Dark spots were often observed in the area of lesions from the side of the skin. Lesions were observed both in males and females, mainly in young animals. During visual examination, samples of pathological material were sticky bundles of hair (downy, less often guard hair) with dried crusts and scales at the base. The result of the fluorescent test with a Wood’s lamp in all samples was negative. Microscopy revealed bundles of downy hairs stuck together and a large amount of purulent debris, which made it difficult to detect fungal elements. As a result of cultural mycological analysis, 51 cultures were isolated, 18 taxa (species and genera) of fungi were identified. At the same time, keratinophilic dermatophyte fungi (Arthroderma cuniculi, Chrysosporium carmichaelii, Chrysosporium spp.) were isolated from 12 % of the samples, probably acting as etiological agents of dermatosis. Growth of dermatophytes was observed only on the DTM-Expert selective differential diagnostic medium; fast-growing non-dermatophyte fungi grew on ordinary media. Non-dermatophyte fungi with keratinolytic properties were also isolated — Scopulariopsis brevicaulis (16 %), Acremonium spp. (14 %), Aspergillus spp. (36 %), which can act as secondary opportunistic pathogens.
Keywords: pathogenic fungi, animal mycoses, dermatomycoses, dermatophytes, Arthroderma, Chrysosporium, Martes zibellina, sable.
1ФГБНУ ФНЦ Всероссийский НИИ экспериментальной |
Поступила в редакцию |
