Сельскохозяйственная биология, 2014, № 4, с. 70-74.

УДК 636.4:619:578.835.2:615.371

doi: 10.15389/agrobiology.2014.4.70rus

ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА АТТЕНУИРОВАННОГО ШТАММА ФК-135 ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ, ВЫРАЩЕННОГО В СУСПЕНЗИИ КЛЕТОК КОСТНОГО МОЗГА СВИНЕЙ

Н.И. ЗАКУТСКИЙ, Т.Г. ШИРОКОВА, С.Г. ЮРКОВ, В.М. БАЛЫШЕВ

Многие годы усилия исследователей были направлены на получение и испытание различных аттенуированных вариантов вируса африканской чумы свиней (АЧС) с целью разработки специфических средств профилактики. Аналогичные исследования проводились и во Всероссийском НИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии, в результате чего В.А. Бурлаковым и др. (1979) пассированием в культуре клеток костного мозга свиней (КМС) вирулентного штамма Франция-32, относящегося к 4-му серотипу, был получен аттенуированный вариант вируса АЧС — ФК-135. Установлено, что 25-кратный концентрат этого штамма, выращенного в монослойной культуре клеток КМС, вызывал защиту 85-100 % подсвинков от заражения гомологичным вирулентным вирусом АЧС. Учитывая, что метод глубинного (суспензионного) культивирования технологичнее, производительнее и экономичнее монослойного, представляло интерес изучить антигенную и иммуногенную активность концентрированного эмульгированного вируссодержащего препарата, который был получен на основе аттенуированного штамма ФК-135 вируса АЧС, накопленного в суспензии клеток КМС в биореакторах. Выполненные исследования показали, что при таком культивировании максимальное накопление вируса (7,50-8,00 lg ГАЕ₅₀/см³) наблюдали на 4-е сут, а КС-антитела (1:16-1:32) — на 5-6-е сут. Титр вируса, выращенного в монослое клеток КМС в матрасах, оказался на 0,25-0,50 lg ГАЕ₅₀/см³ ниже, чем в первом варианте, при слабом отличии по уровню КС-антител в эти же сроки (1:16). Концентрированный эмульгированный препарат на основе штамма ФК-135, выращенного в суспензии клеток КМС в биореакторах, через 7 сут после введения обеспечивал защиту подсвинков против заражения гомологичным вирулентным вирусом в течение 4 мес (срок наблюдения). При этом у привитых животных аттенуированный вирус выделяли из проб крови до 10-14-х сут. Отмечается, что суспензионный метод выращивания аттенуированного штамма ФК-135 в культуре клеток КМС в автоматизированных биореакторах позволяет в контролируемых условиях получать однородный вирусный материал с высокой биологической активностью.

Ключевые слова: африканская чума свиней, АЧС, вирус АЧС, культура клеток костного мозга свиней, клетки КМС, инфекционность, гемадсорбирующая и комплементсвязывающая (КС) активность, иммуногенность.

Полный текст

IMMUNOBIOLOGICAL FEATURES OF AN ATTENUATED AFRICAN SWINE FEVER VIRUS STRAIN FC-135 GROWN IN A PORCINE BONE MARROW CELL SUSPENSION

For many years, efforts of research scientists have been directed towards obtaining and testing of various attenuated variants of African swine fever (ASF) virus to develop specific methods for ASF prevention. Similar investigations were also carried out in the All-Russian Institute of Veterinary Virology and Microbiology which resulted in obtaining an attenuated ASF virus variant FC-135 through passaging a virulent strain France-32 of serotype 4 (V.A. Burlackov et al., 1979). The above strain grown in a porcine bone marrow (PBM) monolayer cell culture and taken at a 25-fold concentration provided 85 to 100 % protection from infection with a homologous virulent ASF virus. Because of higher manufacturability, performance and cost effectiveness of a suspension culture method as compared to those for a monolayer one, the investigation of antigenic and immunogenic activity of a virus-containing emulsified preparation produced in bioreactors from an ASF virus strain FC-135 grown in a PBM cell suspension was of some interest. The results of the reported research showed that when culturing the attenuated ASF virus strain FC-135 in PBM cell suspension in bioreactors, the highest virus accumulation levels of 7.50 to 8.00 lg HAU₅₀/cm³ were observed after 4 day cultivation, and CF-antibody levels of 1:16 to 1:32 were indicated after 5 to 6 day cultivation. The titers of the virus grown in a PBM cell monolayer in mattresses were 0.25 to 0.50 lg HAU₅₀/cm³ lower than those as seen in the previous case, although CF-antibody levels as observed within the same period were of 1:16. A concentrated emulsified preparation designed from the strain FC-135 grown in a PBM cell suspension using bioreactors provided protection of gilts against infection with a homologous virulent virus for 4 months (observation period). Also, we showed that the suspension method of the attenuated strain FC-135 culture in PBM cells using automated bioreactors, being more manufacturable, productive and cost-efficient as compared to the monolayer growth in mattresses, when applied under controlled conditions, provided production of homologous virus materials exhibiting high biological activity.

Keywords: African swine fever, ASF, ASF virus, porcine bone marrow cell culture, PBM cells, infectivity, haemadsorbing activity, complement-fixing (CF) activity, immunogenicity.

Оформление электронного оттиска