doi: 10.15389/agrobiology.2017.2.291rus
УДК 636.3.033:591.391.1:591.463.1:57.086.8
МОДИФИЦИРОВАННАЯ СРЕДА ДЛЯ ПОДГОТОВКИ СПЕРМИЕВ
БАРАНА К ЭКСТРАКОРПОРАЛЬНОМУ ОПЛОДОТВОРЕНИЮ
ПОВЫШАЕТ ИХ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТЬ
А. БЕЛЯЕВ1, Н.А. ГВОЗДЕЦКИЙ1, А.А. КАНИБОЛОЦКАЯ1,
М.П. СЕМЕНЕНКО2, Е.В. КУЗЬМИНОВА2
Длительное сохранение на уровне клетки воспроизводительных качеств животного необходимо для современной селекции, в том числе с применением экстракорпорального оплодотворения (ЭКО). За последние годы достигнуты значительные успехи в разработке методов подготовки спермы животных для оплодотворения яйцеклетки in vitro. Основная цель таких методик — получить популяцию подвижных спермиев с подходящей морфологией и способностью к оплодотворению ооцита in vivo или in vitro. Однако эти приемы не всегда эффективны в силу особенностей подготовки клеток и отсутствия стандартов проведения процедуры. Нами предложена модифицированная среда для экстракорпорального оплодотворения, адаптированная для культивирования спермиев барана. Сперму баранов северокавказской породы (возраст — 2-3 года) получали согласно принятым стандартам и инструкциям. Отобранные образцы оценивали органолептически и при микроскопировании, дальнейшую подготовку проводили по методике-прототипу, описанной в статье A.P. Gandhi (2000), и по разработанной нами методике, согласно которой сперма вносится в глюкозо-цитратно-желточный разбавитель (ГЦЖ), после чего переносится в среду SOF wash, приготовленную без глюкозы и глютамина с добавлением бычьего сывороточного альбумина (6 мг/мл), кофеина (0,2 мг/мл) и гепарина (50 мкг/мл). Установлено, что предложенная нами модифицированная методика, используемая для дозревания спермиев, позволяет повысить их активность на 1,3 балла по сравнению с существующей технологией, при этом число живых спермиев увеличивается на 43,7 %, их жизнеспособность возрастает в 1,6 раза, а доля спермиев с прямолинейно-поступательным движением — в 1,6 раза. Таким образом, разработанная нами методика культивирования сперматозоидов барана, предназначенных для ЭКО, значительно улучшает качественные и количественные характеристики образцов, что позволяет рекомендовать ее применение в лабораториях вспомогательных репродуктивных технологий при подготовке спермы животных к оплодотворению in vitro.
Ключевые слова: сперма, капацитация, экстракорпоральное оплодотворение, бараны, питательные среды.
V.A. Belyaev1, N.A. Gvozdetskii1, A.A. Kanibolotskaya1,
M.P. Semenenko2,
E.V. Kuz’minova2
Modern livestock necessitates controlled breeding, one of the main methods of which is a long-term preservation of animal reproductive qualities at cell level. In recent years, a considerable progress has been achieved in the development of techniques of animal sperm preparation for in vitro fertilization (IVF). In these, the main purpose is to obtain population of motile sperm with a suitable morphology capable of in vivo or in vitro oocyte fertilization. However, these methods are not always effective because of the lack of standards for the procedure. We first in Russia carried out a study on the viability of ram sperm cultured in the modified IVF medium. The semen was sampled from North Caucasian rams, 2-3 years of age, according to a routine technique, used for sheep and goats’ artificial insemination, and domestic State Standards GOST 32222-2013. Sperm was evaluated on organoleptic and microscopic parameters, and cultured for capacitation to render the spermatozoa competent to fertilize an oocyte according to the prototype procedure, described by A.P. Gandhi (2000), and the method, developed by us. In the modified procedure, the sperm is brought to glucose-yolk-citrate diluent (GYC) and then transferred to medium SOF wash, prepared without glucose and supplemented with glutamine with 6 mg/ml bovine serum albumin, 0.2 mg ml caffeine and 50 mg/ml heparin. The developed technique increased the activity of sperm by 1.3 points compared to the commonly used method, the number of live semen increased by 43.7 %, their vitality increased 1.6 times and the number of spermatozoa with rectilinear movements was 1.6 times higher. Thus, the developed technique significantly improves ram sperm qualitative and quantitative characteristics and allows us to recommend this method of animal sperm maturation for in vitro fertilization procedure.
Keywords: sperm, сapacitation, in vitro fertilization, rams, nutrient mediа.
1ФГБОУ ВО Ставропольский государственный аграрный
университет, |
Поступила в редакцию |
