Сельскохозяйственная биология, 2010, № 2, с. 103-109.

УДК 636.4:636.087:591.339

МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В СИСТЕМЕ МАТЬ—ПЛАЦЕНТА—ПЛОД—НОВОРОЖДЕННЫЙ ПРИ ВВЕДЕНИИ В РАЦИОН РЕМОНТНЫХ СВИНОК ПРЕПАРАТОВ РОВАБИО™ EKCELC И ДАФС 25

М.Н. НАСИБОВ, В.С. АВДЕЕНКО, С.А. ЕВТУШОК

На супоросных свиньях породы крупная белая в возрасте 14-16 мес в условиях научно-производственного опыта выполняли морфометрические, гистологические и гистохимические исследования матки, плода на разных сроках беременности (в норме и при патологии), а также показателей развития новорожденных поросят на фоне введения в рацион препаратов Ровабио™ EKCELC (адаптоген) и ДАФС 25 (иммунорегулятор).

Ключевые слова: свиньи породы крупная белая, плацента, плод, Ровабио, ДАФС 25.

В современной ветеринарии к важнейшим направлениям относят разработку и совершенствование средств и методов ранней профилактики нарушений обмена веществ (1, 2) и создание на этой основе надежной системы защиты от патологий репродукции у свиней в условиях промышленных технологий (3, 4). Кроме того, в последние годы установлено, что в процессе постнатального роста и развития свиней регистрируются фазовые изменения, или критические периоды, в формировании иммунной системы, определяющие в дальнейшем развитие иммунодефицитных состояний (5). Особого обсуждения заслуживает вопрос о механизме нарушения обмена веществ в системе мать—плацента—плод, приводящего к повышению числа мертворождений, а также доли в приплодах поросят с пониженной массой тела, со слабо выраженными ориентировочным и сосательным рефлексами (6). В связи с этим представляются актуальными разработки методов своевременной профилактики с использованием иммуномодуляторов и адаптогенов.
Задачей нашей работы была оценка эффективности ферментного препарата Ровабио™ EKCELC («Adisseo», Франция) и селеносодержащего препарата ДАФС 25 (ЗАО «Сульфит», г. Саратов), используемых с профилактической целью в виде кормовых добавок в период супоросности, на основе изучения морфофункциональных изменений в системе мать—плацента—плод.
Методика. Исследования проводили в 2003-2007 годах в ОПХ «Крутое» (Балаковский р-н, Саратовская обл.) на двух группах супоросных ремонтных свинок (контроль и опыт) породы крупная белая в возрасте 14-16 мес. Рационы животных и условия содержания соответствовали принятым в хозяйстве. В опытной группе животные получали с премиксом препараты Ровабио™ EKCELC и ДАФС 25 в соответствии с рекомендациями производителей.
Отбор, подготовку проб, морфометрические, гистологические и гистохимические исследования матки и плода на разных сроках супоросности, а также оценку течения беременности и показателей развития приплода осуществляли общепринятыми методами (1, 2, 4), число Т-лимфоцитов и тимоцитов определяли, как описано (6).
Для статистической обработки данных использовали прикладные программы Microsoft Office.
Результаты. Как оказалось, при длительном включении в рацион Ровабио™ EKCELC и ДАФС 25 морфологическое состояние репродуктивной системы ремонтных свинок в период супоросности значительно отличалось от контроля (табл. 1).

Так, масса матки у ремонтных свинок к концу супоросности в опыте (введение в рацион кормовых добавок препаратов) равнялась 12,44±0,63 кг против 8,26±0,38 кг в контроле (p < 0,01). Гистологические и гистохимические исследования материнской части плаценты показали, что средняя толщина покровного эпителия матки в контроле составляла от 14,80±1,70 до 27,80±1,90 мкм, в опыте — от 15,50±1,90 до 35,40±2,70 мкм (p < 0,01).
Как в опытных, так и в контрольных образцах среди клеток эпителия превалировали цилиндрические и кубические. Между свободными краями эпителиальных клеток были видны углубления, в которых находились цитоплазматические выросты клеток хорионального эпителия. Гликоген в покровном эпителии не выявлялся, количество диастазорезистентного ШИК-положительного вещества было невелико, содержание гликозаминогликанов оказалось очень низким. В маточных железах отмечали интенсивный синтез секрета (от поверхностной части до концевых участков). Об этом свидетельствуют интенсивная пиронинофилия цитоплазмы, обилие ШИК-положительных диастазорезистентых зерен, наличие куполо- и каплеобразных выростов на свободной поверхности многих железистых клеток, а также высокое содержание кислых гликозаминогликанов. Материнская поверхность в плаценте имела дольчатое ячеистое строение, число узелков микрокрипт — до 17-23 шт. В центре располагались более крупные и толстые микрокрипты, к периферии дольки уплощались, в результате чего плацента приобретала веретенообразную форму.
Масса детской части плаценты у свинок, потребляющих с кормом препараты Ровабио™ EKCELC и ДАФС 25, была существенно ниже во все периоды супоросности по сравнению с показателем в контрольной группе (p < 0,01). В пуповине имелась одна вена и две артерии. Длина пупочного канатика колебалась от 7,30±0,71 до 23,00±1,10 см при статистически достоверном превышении у свинок опытной группы (p < 0,05) (см. табл. 1).
Известно, что функциональное состояние системы мать—плацента—плод определяется особенностями морфологических структур матки и материнской плаценты (1). Кроме того, важную роль в регуляции обмена веществ в системе мать—плацента—плод играют микроциркуляционные процессы, нарушение которых в фетальной части плаценты характеризуется повышением тонуса артериол и протока капилляров. Это приводит к возникновению участков ишемии, увеличению проницаемости сосудов, что вызывает преваскулярный отек и диапедезные кровоизлияния, а также изменение агрегатного состояния и интенсивности циркуляции крови в матке и плаценте.
Следует отметить, что на начальной стадии эти процессы способствуют улучшению метаболизма и снабжению плодов кислородом, однако затем происходит резкое замедление скорости кровотока и, как следствие, возрастание вязкости крови, а также повышение посткапиллярного сопротивления, представляющее собой одно из важнейших микроциркуляторных расстройств. Нарушение микроциркуляции сопровождается агрегацией эритроцитов, что препятствует нормальной диффузии кислорода, значительно увеличивает площадь обменной поверхности и резко снижает транспортную способность агглютинированных эритроцитов, вследствие чего недостаточная оксигенация прогрессирует, приводя к торможению ряда ферментативных процессов и, в конечном итоге, к усилению процессов гликолиза, накоплению молочной кислоты и развитию метаболического ацидоза. Это служит причиной фетоплацентарной недостаточности, внутриутробной гипоксии, задержки развития плодов и рождения гипотрофного приплода.
В этой связи мы оценили, каким образом изменяется гисто- и ультраструктура эндометрия и плаценты в зависимости от состояния матери и плода в контроле и на фоне введения в рацион супоросных свинок препаратов Ровабио™ EKCELC и ДАФС 25.
Фетальная часть плаценты имела более выраженные различия по массе между контролем и опытом: в опыте этот показатель значительно (p < 0,05; p < 0,01) превышал контрольный. Удельный объем фетальной части плаценты коррелировал с объемом ворсинок хориона, который у свинок опытной группы составлял 65 %, контрольной — только 45 % от объема всей фетальной части (p < 0,05).
Содержание жидкости в аллантоисе (см. табл. 1) у всех животных изменялось по срокам супоросности — от 85,70±0,75 и 165,40±9,40 мл на 35-37-е сут до 322,70±12,70 и 521,00±12,70 мл на 70-74-е сут с постепенным уменьшением до 35-120 мл или полного отсутствия к рождению. Сначала она была бесцветной, затем желтоватой, к концу супоросности мутнела и приобретала грязно-бурый цвет с зеленоватым оттенком.
Прозрачная водная оболочка в конце 1-го мес супоросности с одной стороны плотно прилегала к хориону, с другой — к аллантоису. На 74-е сут амнион соприкасался стороной большей кривизны и боковыми поверхностями с хорионом. Длина амниона на 74-е сут супоросности составляла 4,20±0,51, ширина — 3,50±0,47 см, к концу 4-го мес — соответственно 57,30±1,37 и 26,70±1,52 см. В начале 2-го мес супоросности (опыт) в полости амниона содержалось всего 2,50±0,12 мл прозрачной бесцветной жидкости, количество которой к началу 74-х сут возрастало до 437,30±21,40, после чего снижалось (см. табл. 1). Жидкость становилась коричневой, содержала слизь и крупные частицы первородного кала.
К окончанию 1-го мес внутриутробного развития плодовые оболочки концами начинали вдавливаться друг в друга, образуя в местах соприкосновения прозрачные бессосудистые участки. В начале 3-го мес происходило слипание хорионов, лежащих в одном роге, а также хорионов обоих рогов матки, которое было настолько прочным, что при разъединении их часто повреждали. Хорион, опережая в росте плодовместилище, был собран в поперечные складки, число которых со 2-го мес значительно возрастало. Длина хориона к концу 4-го мес по сравнению с 1-м увеличивалась более чем в 2 раза, ширина и площадь — примерно в 4, масса — в 8 раз. На наружной поверхности хориона наблюдалось скопление ворсинок, формирующих хориональные узелки округлой формы, едва заметные в конце 1-го мес и увеличивающиеся в размере к рождению плода. Хориональные узелки располагались по обе стороны от магистральных сосудов рядами, формируя на поверхности хориона сетчатую структуру.
Число узелков правой и левой части хориона было неодинаковым, они также различались по размеру и форме: в амниотической области хориона, ближе к пуповине, хориональные узелки крупнее, по направлению к рогам — мельче, в бессосудистых участках они отсутствуют.
Хориональные узелки постепенно увеличивались со 2-го мес беременности, начинали внедряться в слизистую ямок (крипт эндометрия), обеспечивая прочную связь детской и материнской плаценты. Однако хорион при этом извлекался из крипт слизистой эндометрия достаточно легко. Процесс внедрения хориональных узелков в слизистую крипт эндометрия начинался в амниотических областях, распространяясь затем по направлению к рогам хориона. В конце 2-го мес супоросности в связи с изменением формы хориональных узелков, а также вследствие усиления процесса внедрения в крипты слизистой эндометрия, хориональные узелки приобретали вид сосочков с более узкой вершиной, на которой отмечали кратерообразные формирования. В редких случаях при слиянии образовывались шаровидные узелки.
Наряду с основными хориональными узелками, расположенными достаточно упорядоченными рядами, встречались слаборазвитые, расположенные случайным образом (чаще всего ближе к верхушкам хориона, в отдельных случаях — по всему хориону).
В опытной группе у свиней плацента имела форму вытянутого, суживающегося к концам мешка с диаметром в средней части 14,90±1,40 см. Площадь материнской поверхности — 203,8±14,7 см², плодо-плацентарный коэффициент — 3,17±0,72.
Масса плаценты также варьировала (по нашим данным, в общем от 367,10±13,60 в опыте до 319,70±10,40 г в контроле при объеме соответственно от 330,4±13,4 до 298,5±11,6 мл), что характеризует внутриутробные условия для роста и развития плодов. Величина площади материнской поверхности плаценты оказалась признаком, характеризующимся значительной вариабельностью в норме и при различных гестозах. Так, специально проведенные наблюдения показали, что при анемии площадь материнской поверхности составила 180,40±7,74, при нефропатии — 165,30±8,27, гепатопатии — 192,40±8,24 и параплегии — 172,50±9,12 см², у клинически здоровых в период супоросности свиноматок — 203,80±4,20 см², а маточно-плацентарный коэффициент варьировал от 3,11±0,74 до 3,35±0,51.
При гестозах маточная поверхность плаценты выглядела неровной, бугристой (в центральной части располагались мелкие узелки, на периферии — крупные), на разрезе — губчатой, красно-розовой. В отдельных случаях наблюдалась анемия либо полнокровие, которые имели очаговый и диффузный характер.
В толще плаценты, преимущественно в периферических котиледонах, часто (особенно при гестозах) обнаруживали зоны инфаркта — обычно они располагались ближе к маточной поверхности, как правило, имели белый (изредка желтовато-белый) цвет, клиновидную форму. Значительно реже, чем инфаркты, выявлялись межворсинчатые тромбы (преимущественно в толще плаценты). Стенки сосудов, особенно артерий, а также ворсинки плаценты при гестозах у супоросных свиноматок склеротизированы. Склероз стромы ворсинок характеризуется избыточным появлением коллагеновых волокон в итерстиции и стенках сосудов, что сопровождается их утолщением, сужением (с явлениями гиалиноза вплоть до облитерации просвета) и выраженной пролиферацией эндотелия.
Отек ворсинок проявлялся в увеличении объема (при этом их форма становится фестончатой). Строма отечных ворсинок разрыхленная, капилляры чаще малокровные, сдавленные, стенки кровеносных сосудов отечные. Описанные морфологические особенности плаценты при гестозах супоросных свиноматок свидетельствуют о нарушении ее гистофункциональной активности, что в итоге определяло рост и развитие плодов.

Так, абсолютные показатели массы плода колебались от 24,70±0,25 до 909,60±19,30 г у свинок контрольной группы при статистически достоверном различии (p < 0,01) с аналогичными показателями у животных опытной группы — от 33,60±0,29 до 1123,40±32,50 г (табл. 2). Кроме того, значительно варьировал плодо-плацентарный коэффициент (p < 0,05). У поросят от матерей, получавших в рационе Ровабио™ EKCELC и ДАФС 25, масса при рождении составляла от 1,165±0,050 до 1,325±0,060 кг, для них было характерно умеренное развитие двигательно-пищевых рефлексов, хороший аппетит, нормальная частота дефекаций и мочеиспускания, своевременное и нормальное проявление статических функций и свободное движение, ровная кожа с хорошо выраженным подкожным жировым слоем, развитый скелет без рахитических отклонений. В контрольной группе наблюдалось достоверное снижение массы тела новорожденных (на 30-40 %, или 0,921±0,070 кг), поросята имели слабовыраженные двигательно-пищевые рефлексы, бледные видимые слизистые оболочки, редкую, короткую и жесткую щетину, складки кожи в области шеи и около хвоста, мягкие ушные раковины. Подкожный жировой слой отсутствовал. Трубчатые кости были короткими, глаза запавшими (из-за истончения жировой подушки глазного яблока и собственно жировой сумки), дыхание — замедленное, поверхностное, сердечные тоны слабые, пульс аритмичный и замедленный с уменьшением пульсовой волны, сердечный толчок ощущался с обеих сторон грудной клетки. Всего в приплоде нормотрофики составляли 69,8±3,5, макросомы — 6,3±1,3 и гипотрофики — 24,6±1,3 %, то есть около 30 % от общего числа новорожденных.
Абсолютные показатели массы внутренних органов у новорожденных поросят-нормотрофиков при неосложненной супоросности были следующими: печень — 27,20±0,51; почки — 8,39±0,17; легкие — 27,50±0,67 и селезенка — 1,72±0,02 г. При врожденной гипотрофии или задержке внутриутробного развития масса практически всех органов снижалась.
Несмотря на то, что печень новорожденных поросят имела относительно высокую массу, ее дефицит (как относительный, так и абсолютный) был наиболее выражен у поросят-гипотрофиков, рожденных от матерей, страдавших в период супоросности гестозом. У таких поросят печень характеризовалась умеренным кровенаполнением, тогда как у нормотрофиков, полученных от клинически здоровых супоросных свиноматок, она была полнокровной, с мелкими субкапсулярными кровоизлияниями.
При гистологическом исследовании у поросят-гипотрофиков обнаружили умеренно выраженный отек печени, сопровождающийся утолщением и наполнением стенок кровеносных сосудов плазмой. Нередко отмечался прикапиллярный отек, расширение пространств Диссе, разволокнение междольковой соединительной ткани, накопление плазмы. Выявлялись дистрофические изменения в гепатоцитах, которые увеличивались в размерах. Цитоплазма таких клеток приобретала сетчатый вид, в ней появлялись вакуоли, включения белковой и жировой природы. В междольковой соединительной ткани печени, а также внутри долек вдоль капилляров наблюдалось скопление эритробластов и миелобластов.
У поросят, рожденных от клинически здоровых супоросных свиноматок, печень характеризовалась застойным полнокровием, особенно в венах, расположенных в междольковой соединительной ткани. Гепатоциты имели обычное строение, средние размеры и полуовальную форму, располагались плотно. Васкуляторный полюс гепатоцитов преобладал над билиарным, наблюдались многочисленные короткие выпячивания цитоплазмы в пространство Диссе. Желчные капилляры локализовались между двумя гепатоцитами. Очаги кроветворения в дольках и междольковой соединительной ткани были представлены единичными клетками.
Масса легких у мертворожденных поросят была достоверно снижена (р < 0,05). Однако достоверных различий по этому показателю между поросятами, рожденными от клинически здоровых и переболевших в период супоросности гестозом матерей, как в опытной, так и в контрольной группе выявить не удалось. Легкие интранатально погибших поросят плотные, гистологически отмечается неравномерное полнокровие, спадание большинства альвеол. У неонатально погибших поросят-гипотрофиков легкие расправлены, на поверхности разреза выявляются темноокрашенные участки, местами уплотненные. При микроскопировании в таких участках отмечали неравномерное полнокровие, очаги ателектаза и эмфиземы, расправленные и полурасправленные альвеолы, а также гиалиновые мембраны. У новорожденных поросят-нормотрофиков и макросом гиалиновых мембран в легких после гибели не наблюдали.
Масса почек у новорожденных поросят не превышала 8,95±0,17 г и была снижена у гипотрофных особей, рожденных от гестозных свиноматок. Почки имели характерное дольчатое строение, которое особенно хорошо проявлялось в случаях гестоза супоросных свиноматок у гипотрофиков. На разрезе строение коркового и мозгового вещества выражено отчетливо. При микроскопировании у новорожденных отмечали полнокровие, дистрофические изменения в эпителии извитых канальцев. При гестозах супоросных свиноматок рождаются поросята, у которых в корковом слое почек выявляются недифференцированные клубочки, располагающиеся не только в субкапсулярном слое, но и в толще коры.
Сравнивая иммунные показатели у поросят, матери которых получали препараты иммунорегулятора и адаптогена, обнаружили, что на 24-м ч жизни у животных, рожденных от свиноматок из опытной группы, число активированных Т-лимфоцитов и тимоцитов достоверно повышалось относительно контроля (p < 0,05; p < 0,01). В возрасте 21 сут вследствие высокой функциональной активности иммунной системы эти поросята превосходили контрольных по числу тимоцитов на 15,7 (p < 0,01) и индукторов-хелперов — на 15,1 % (p < 0,01).
Итак, на фоне введения в рацион супоросным ремонтным свинкам препаратов Ровабио™ EKCELC и ДАФС 25 происходит достоверное повышение морфометрических показателей материнской плаценты во все периоды супоросности, а также уменьшение общей массы, длины пупочного канатика, увеличение массы фетальной части, толщины и объема детской плаценты. Плодо-плацентарный коэффициент к сроку родов у свинок в опытной группе был более благоприятным, чем в контрольной. Абсолютная масса внутренних органов плода оказалась выше у свинок опытной группы. Наибольшими показателями иммунокомпетентности характеризовались новорожденные поросята, полученные в опытной группе (как на 1-е сут после рождения, так и к отъему).

Л и т е р а т у р а

1. Н о в и к о в  В.Д. Морфогенез плаценты у млекопитающих. Автореф. докт. дис. Новосибирск, 1972.
2. М а к а р и ч е в а  А.Д. Комплексная лабораторная оценка течения беременности. Л., 1982.
3. М а р т ы н е н к о  Н.А. Эмбриональная смертность сельскохозяйственных животных и ее предупреждение. Киев, 1971.
4. К ю б а р  Х.В. Морфологическая характеристика гистоструктуры эндометрия коров и свиноматок в различных физиологических состояниях. Автореф. докт. дис. М., 1983.
5. К у з н е ц о в  А.И.,  Т и м а к о в  А.В. Способ повышения качества рождающихся поросят в условиях промышленной технологии. В сб.: Функциональная морфология, болезни плодов и новорожденных животных. Саранск, 1993: 35-41.
6. Е м е л ь я н е н к о  П.А. Иммунология внутриутробного периода. M., 1989.

MORPHOFUNCTIONAL CHANGES IN SYSTEM MOTHER—PLACENTA— EMBRYO—EWBORN AFTER ADDITION THE ROVABIO™ EKCELC AND DAFS 25 PREPARATIONS TO THE RATION OF REMOUNT PIGS

M.N. Nasibov, V.S. Avdeenko, S.A. Evtushok

In pregnant pigs of the Large White breed at the age of 14-16 months in the conditions of scientific-practical experiment the authors have made the morphometric, histological and histochemical investigations of dam, the embryo at the different staged of pregnancy (in the norm and the pathology), and also the parameters of development of newborn piglets after addition to their ration of the Rovabio™ EKCELC (adaptogen) and DAFS 25 (immunoregulator).

Key words: pigs, Large White breed, placenta, fetus, Rovabio, DAFS 25 preparation.

Оформление электронного оттиска