doi: 10.15389/agrobiology.2018.6.1219rus
УДК 636.2:591.463.1:57.086.8
ОПТИМАЛЬНЫЙ РЕЖИМ ОТТАИВАНИЯ КРИОКОНСЕРВИ-РОВАННОЙ
СПЕРМЫ ГОЛШТИНСКИХ БЫКОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ
Н.А. КОМБАРОВА1, Г.В. ЕСКИН1, А.И. АБИЛОВ2,
Ю.А. КОРНЕЕНКО-ЖИЛЯЕВ2, В.Н. ВИНОГРАДОВ2, А.А. ГАЛАНКИНА1
С повышением молочной продуктивности растет число животных с неполноценными половыми циклами и тихими проявлениями охоты, в связи с чем возникает потребность в семени с высокими качественными и количественными характеристиками. Кроме того, при искусственном осеменении после разбавления нативного семени, его расфасовки, криоконсервации и оттаивании число сперматозоидов в спермодозе снижается, что также значительно повышает требования к их качеству. Оттаивание — один из критических этапов при стандартной процедуре подготовки замороженной спермы быков-производителей к искусственному осеменению. Как следствие, процедуры криоконсервации и деконсервации требуют оптимизации протоколов с учетом предлагаемых модификаций этих методов и изменяющихся воспроизводительных способностей животных. В своем исследовании мы оценили влияния ранее рекомендованных и предложенных нами режимов деконсервации на сохранность сперматозоидов у российских голштинских быков-производителей и выявили режимы, которые достоверно обеспечивают пролонгированное положительное влияние на качественные характеристики сперматозоидов и лучшее сохранение их жизнеспособности после оттаивания. Сперма быков (возраст животных 3-7 лет) была расфасована и крионсервирована в полипропиленовых соломинках (72 дозы) на оборудовании фирмы «IMV» (модель IS4, Франция) и необлицованных гранулах (90 доз) на пластинах сухого льда согласно ГОСТ 26030-2015 и Национальной технологии замораживания и использования спермы племенных быков-производителей. Всего было исследовано 162 дозы семени объемом 0,25 мл. Сразу после оттаивания и последующей инкубации в течение 5, 20 и 24 ч in vitro при 38 °С учитывали подвижность и скорость движения сперматозоидов. Подвижность определяли визуально в процентах при увеличении ×150 (микроскоп CX41, «Olympus», Япония). В этих же образцах автоматически на спермоанализаторе SFA-500 (НПО «Биола», Россия) измеряли подвижность (%), долю быстрых сперматозоидов (%) и скорость движения (мкм/с). При помощи термопары (Center 304, «Center Technology Corp.», Тайвань) определяли температуру таяния семени в динамике и по окончании оттаивания. Эксперименты показали, что разные способы деконсервации спермодоз в соломинках и гранулах, протестированные в работе, в целом дают стабильные и почти идентичные результаты. Однако при последующей длительной инкубации спермодоз in vitro в течение 24 ч при температуре тела животного (38 °С) лучшие результаты по выживаемости мужских половых клеток зафиксированы в образцах, которые размораживали в водяной бане при 38 °С в течение 10 с (p < 0,001).
Ключевые слова: голштины, сперматозоиды, режим оттаивания, подвижность, скорость движения, соломинки, необлицованные гранулы.
OPTIMAL MODE TO THAW CRYOPRESERVED SPERM OF HOLSTEIN
BULL SIRES
N.A. Kombarova1, G.V. Eskin1, A.I. Abilov2, Yu.A. Kornienko-Zhilyaev2, V.N. Vinogradov2, A.A. Galankina1
As milk yielding increases, the number of animals with defective sexual cycles and quiet manifestations of hunting grows, and therefore there is a need for semen with high quality. Also, at artificial insemination, after dilution of the native semen, packaging, cryopreservation and thawing, the number of spermatozoa per sperm dose decreases. This also necessitates semen with high quality parameters. One of the key stages of the standard processing of cryopreserved bovine semen prior to artificial insemination is the thawing procedure. Therefore, cryopreservation and thawing procedures should be optimized with regard to the proposed modifications of these methods and the changing reproductive abilities of animals. In our study, we compared the effects of previously recommended thawing protocols and those proposed by us on the safety of spermatozoa of Russian Holstein sires and identified the modes that reliably provide a prolonged positive effect on the quality characteristics of spermatozoa and better preservation of their viability after thawing. The semen of 6-7 year-old Holstein bulls was cryopreserved in polypropylene straws (72 doses) with the use of the IMV Technology equipment (France) and in uncoated pellets (90 doses) on the dry ice plates according to GOST State Standard 26030-2015 and the National Technology for Freezing and Handling Semen of Pedigree Bull Sires. Thus, 162 semen doses 0.25 ml each were analyzed. The sperm motility and movement velocity parameters were assessed immediately and after in vitro post-thawed incubation for 5 to 24 hours at 38 °С. The percentage of motile semen was visually assessed with the Olympus microscope CX41 (Japan) at ×150 magnification. Thereafter, in the same samples the motility (%), the number of the highly motile sperm (%), and the sperm velocity (mcm/sec) were automatically measured with the SFA-500 Sperm Analyzer (Biola Company, Ltd, Russia). The dynamic of thawing temperature up to the final value was measured with the Center 304 thermocouple. It has been ascertained that the effects of different procedures used for thawing straws and pellets are quite steady and approximately the same. However, the best results of the male sex cell survival after the long in-vitro incubation period (for 24 hours at the animal body temperature of 38 °С) are in the samples thawed in a water bath at 38 °С for 10 sec when compared to those for the other methods (p < 0.001).
Keywords: Holsteins, sperm, thawing procedure, motility, sperm velocity, straws, uncoated pellets.
1АО «Головной центр по воспроизводству |
Поступила в редакцию |
