doi:10.15389/agrobiology.2016.6.861rus
УДК 636.32/38:619:578.821.6
ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ВЫДЕЛЕНИЕ ВИРУСА КОНТАГИОЗНОЙ
ЭКТИМЫ ОТ ОВЕЦ В РЕСПУБЛИКЕ ТЫВА В 2015 ГОДУ
Д.В. ЯНЖИЕВА1, Н.И. САЛЬНИКОВ1, Т.Р. УСАДОВ1,
С.П. ЖИВОДЕРОВ1,
Л.К. САРЫГЛАР2, А.В. ЛУНИЦИН1
Контагиозная эктима — инфекционная болезнь овец и коз, характеризующаяся поражением слизистых оболочек ротовой полости, кожи губ, головы, молочных желез и конечностей. Вирус контагиозной эктимы (Orf virus, ВКЭ) — представитель рода Parapoxvirus в подсемействе Chordopoxvirinae семейства Poxviridae. Геном представлен линейной двухцепочечной молекулой ДНК размером 138 т.п.н., содержащей 132 открытые рамки считывания. Антигенная структура вируса недостаточно изучена, не все штаммы серологически идентичны, в связи с чем актуально выделение и изучение его новых изолятов. Анализ отечественной литературы показал отсутствие подобных работ на фоне малого числа зарегистрированных вспышек контагиозной эктимы в России. Мы впервые выделили ВКЭ от овец в Республике Тыва после экспериментального заражения полученным от них биоматериалом, идентифицировали его и изучили биологические свойства изолята. В августе 2015 года в Республике Тыва было зарегистрировано заболевание овец, характеризующееся развитием эритемы, везикул, пустул и струпьев на коже ушей и конечностей. Струпья от этих животных были взяты для выделения и идентификации возбудителя. С этой целью экспериментально заразили трех ягнят суспензией струпьев с кожи инфицированных животных (губы на границе кожной и слизистой поверхностей скарифицировали, а затем наносили инокулюм ватными тампонами). На 4-5-е сут после заражения на губах ягнят появились везикулы, перешедшие в стадию пустул и струпьев. Заживление поражений наблюдали через 2 нед. Суспензию струпьев от инфицированных животных использовали для инокуляции первичной культуры клеток почки овцы. На 7-е сут после инокуляции клеточный монослой собрали и провели 2-й пассаж. В монослоях 1-го и 2-го пассажей специфического цитопатического действия вируса не наблюдали. Смывы с кожи губ от экспериментально инфицированных ягнят исследовали методом ПЦР в реальном времени согласно описанному протоколу (G. Venkatesan с соавт., 2014). При этом ДНК вируса контагиозной эктимы была выявлена в смывах, полученных на 7-28-е сут после заражения. ДНК вируса контагиозной эктимы также обнаружили в струпьях от инфицированных ягнят и в лизатах клеточного монослоя после 2-го пассажа. При исследовании референтных образцов ДНК ВКЭ (штамм IA82), нодулярного дерматита (штамм Вакцинный), оспы овец (штаммы Монгольский и Б5/96), оспы коз (штамм ОК/А-04) положительные результаты получили только с ДНК ВКЭ, чем подтверждается специфичность системы. Аналитическая чувствительность ПЦР-РВ для выявления генома вируса контагиозной эктимы составила 1,3±0,03 lg ТЦД50/см3. Таким образом, возбудитель, вызвавший в 2015 году болезнь у овец в Республике Тыва, выделен в культуре клеток почки овцы от экспериментально инфицированных ягнят и идентифицирован как вирус контагиозной эктимы.
Ключевые слова: овцы, контагиозная эктима, вирус, ПЦР, культура клеток.
IDENTIFICATION AND ISOLATION OF ORF VIRUS FROM SHEEP IN THE REPUBLIC OF TUVA IN 2015
D.V. Yanzhieva1, N.I. Sal’nikov1, T.R. Usadov1, S.P. Zhivoderov1,
L.K. Saryglar2,
A.V. Lunitsin1
Orf is infectious disease of sheep and goats, characterized by lesions of mucosa of the oral cavity, skin of lips, head, mammary glands and limbs. The causal agent (virus of contagious ecthyma — Orf virus) is a member of genus Parapoxvirus, subfamily Chordopoxvirinae, family Poxviridae. Genome of the Orf virus consists of linear double stranded DNA (138 kbp) and contains 132 open reading frames. Its antigenic structure is poorly understood, and strains are not serologically identical. That is why the investigation of novel isolates of Orf virus is actual. However, we are not aware of such research in Russia possibly due to rare outbreaks recognized. We first identified Orf virus in sheep from Tuva Republic and studied biological properties of the isolate. Disease of sheep, characterized by erythema, vesicles, pustules and scabs on ears and legs has been registered in August 2015 in Tuva Republic. The scabs were sampled for isolation and identification of the causative agent. For this result three lambs were experimentally infected with the scab suspension. The mucocutaneous borders of the lips along the labial commissures were scarified and inoculum was loaded by cotton swabs. The lip vesicles appeared at days 4-5 and then formed pustules and scabs. After 2 weeks the lesions healing occurred. The suspension of scabs from lips of infected lambs was used to inoculate sheep kidney cell culture. In 7 days post inoculation the cell monolayer was harvested for second passage. However, we did not observe specific cytopathic effect in the monolayers during these passages. The skin swabs from experimentally infected lambs were examined by Real-Time PCR in accordance to the protocol developed by G. Venkatesan et al. (2014), and Orf virus DNA was detected at days 7 to 28 post infection. We also detected Orf virus DNA in scabs from the infected lambs and in lysates of the monolayers harvested after second passage. The PCR test was positive for reference strain IA82 of Orf virus unlike other viruses (nodular dermatitis vaccine strain, sheep pox strains Mongolian and B5/96 or goatpox strain QA/A-04) that confirmed specificity of the PCR system. Its analytical sensitivity to detect Orf virus genomic DNA was 1.3±0.03 lg TCD50/cm3. Thus, the pathogen which caused the disease of sheep in Tuva Republic in 2015 was isolated from experimentally infected lambs using sheep kidney cell culture and identified as Orf virus.
Keywords: sheep, Orf virus, PCR, cell culture.
1ГНУ Всероссийский НИИ ветеринарной |
Поступила в редакцию |
Оформление электронного оттиска
