doi:10.15389/agrobiology.2016.6.845rus
УДК 619:616.98:578.842.1:57.083.3
ВАЛИДАЦИЯ ИФА-НАБОРА ДЛЯ ОБНАРУЖЕНИЯ АНТИТЕЛ
К ВИРУСУ
АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ В КРОВИ И
СЕЛЕЗЕНКЕ ДОМАШНИХ
СВИНЕЙ И ДИКИХ КАБАНОВ
О.М. СТРИЖАКОВА, В.М. ЛЫСКА, А.С. МАЛОГОЛОВКИН,
М.Б. НОВИКОВА, М.В. СИДЛИК, И.В. НОГИНА, А.Э. ШКАЕВ,
Е.А. БАЛАШОВА, В.В. КУРИННОВ, А.П. ВАСИЛЬЕВ
Особенности протекания африканской чумы свиней (АЧС, возбудитель — ДНК-со-держащий вирус семейства Asfarviridae, поражает как диких кабанов Sus scrofa, так и домашних свиней Sus scrofa domestica) и ее формы следует учитывать для эффективного использования различных методов диагностики АЧС, направленных на выявление возбудителя или специфических антител. Особенно важна диагностика АЧС у диких кабанов. Восприимчивость к вирусу АЧС дикого кабана хорошо известна, заболевание неоднократно воспроизводилось в эксперименте, а также было установлено в естественных условиях у дикого европейского кабана. При отстреле диких кабанов очень часто в лаборатории доставляются только пробы органов, поэтому мы приняли решение изучить диагностическое значение антител, выявленных в тканях, и определить эффективность применения разработанной ранее тест-системы при таких исследованиях. В статье представлены результаты валидации непрямого варианта ИФА (коммерческий набор «ВНИИВВиМ АЧС-ИФА Ат/Аг») для обнаружения специфических антител против вируса АЧС в сыворотках крови и экстрактах тканей селезенки. В качестве метода сравнения использовали реакцию непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ). Для оценки полученных данных применили ROC-анализ. Тестирование с помощью непрямого ИФА положительных (n = 66) и отрицательных (n = 410) проб сывороток крови свиней показало высокую чувствительность и специфичность ИФА относительно РНИФ. Из 476 проб сывороток, исследованных методом непрямого ИФА, только 8 (1,6 %) попали в область положительной/отрицательной отсечки. Самые высокие показатели чувствительности (100 %) и специфичности (99,27 %) непрямого ИФА при исследовании сывороток крови от домашних свиней и диких кабанов установлены при величине отсечки 0,264. Пробы экстрактов селезенки были отобраны после отстрела клинически здоровых диких кабанов из неблагополучной по АЧС Смоленской области (2013-2014 годы). С учетом характера течения острой формы болезни мы можем предположить у положительно реагировавших животных состояние, соответствующее инкубационному периоду развития патологии. При тестировании положительных (n = 59) и отрицательных (n = 678) проб экстрактов ткани селезенки мы также установили высокую чувствительность и специфичность непрямого ИФА относительно РНИФ. Из проверенных проб (n = 737) 10 проб (1,3 %) попали в область положительной/отрицательной отсечки. Самая высокая чувствительность (100 %) и специфичность (98,82 %) установлены при величине отсечки 0,284. Таким образом, тестовый набор показал хорошие результаты при исследовании сывороток крови свиней — чувствительность 100 % (94,6-100 %) и специфичность 99,27 % (97,90-99,80 %), при исследовании проб экстрактов ткани селезенки — чувствительность 100 % (93,90-100 %), специфичность 98,82 % (97,70-99,50 %).
Ключевые слова: африканская чума свиней, специфические антитела, непрямой ИФА, ROC-анализ.
O.M. Strizhakova, V.M. Lyska, A.S. Malogolovkin, M.B. Novikova,
M.V. Sidlik,
I.V. Nogina, A.E. Shkaev, E.A. Balashova, V.V. Kurinnov,
A.P. Vasil’ev
The causal agent of African swine fever (ASF) is a DNA virus belonging to Asfaviridae family which affects both wild boar Sus scrofa and domestic pig Sus scrofa domestica. Special features of the course of (ASF and its forms should be considered for the effective use of various ASF diagnostic methods aimed at the pathogen or specific antibody identification. ASF diagnosis in the wild boar is of special importance. The wild boar susceptibility to ASF virus is well known, and the disease has been repeatedly reproduced in experiments and detected in European wild boars in natural conditions. It is not unfrequently that when shooting wild boars, only organ samples are delivered to laboratories, so we decided to estimate the diagnostic value of the antibodies detected in tissues and evaluate an earlier developed test system for its efficacy when used for the assay. This report represents the results of validation of an indirect ELISA (a commercial kit «VNIIVViM ASF-ELISA Ab/Ag») ASF virus specific antibody detection in blood serum and spleen tissue extracts. For comparison, an indirect immunofluorescence assay (indirect IFA) was used. To estimate the obtained results, ROC analysis was applied. Examination of positive (n = 66) and negative (n = 410) porcine blood serum samples using indirect ELISA showed high sensitivity and specificity of the method with reference to IFA. Among the 476 serum samples examined in indirect ELISA, only 8 sera (1.6 %) were within the positive/negative cutoff area. The highest sensitivity (100 %) and specificity (99.27 %) for indirect ELISA when examining both domestic pig and wild boar blood sera were determined at a cutoff value of 0.264. The samples of spleen extracts to be used for the study were collected from clinically healthy wild boars in ASF-affected Smolensk region in 2013 to 2014. In view of an acute form of the disease, we can suspect that the animals exhibiting positive reaction were in a latency period of the pathogeny. When examining the positive (n = 59) and negative (n = 678) spleen extracts, we also determined high sensitivity and specificity levels of indirect ELISA with reference to indirect IFA. Among the samples examined (n = 737), 10 (1.3 %) samples of spleen extracts were within the positive/negative cutoff area. The highest sensitivity (100 %) and specificity (98.82 %) were observed at a cutoff value of 0.284. Thus, we confirmed the assay to be effective for porcine blood sera with 100 % sensitivity (94.6 to 100 %) and 99.27 % specificity (97.90 to 99.80 %) and for spleen extracts with 100 % sensitivity (93.90 to 100 %) and 98.82 % specificity (97.70 to 99.50 %).
Keywords: African swine fever, specific antibody, indirect ELISA, ROC analysis.
ГНУ Всероссийский НИИ ветеринарной |
Поступила в редакцию |
Оформление электронного оттиска
