doi: 10.15389/agrobiology.2016.6.853rus
УДК 619:578:57.083.2
ПЕРМИССИВНОСТЬ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК СИНОВИАЛЬНОЙ
МЕМБРАНЫ ЯГНЕНКА В ОТНОШЕНИИ ВИРУСА БОЛЕЗНИ АКАБАНЕ
Е.А. БАЛАШОВА, Е.И. БАРЫШНИКОВА, В.М. ЛЫСКА,
О.Л. КОЛБАСОВА,
А.В. ЛУНИЦИН, Д.В. КОЛБАСОВ
В связи с многообразием и разносторонностью экономических и туристических связей с ближним и дальним зарубежьем не исключен случайный, а иногда и целенаправленный занос на территорию Российской Федерации возбудителей экзотических инфекций, в том числе болезни Акабане. Болезнь Акабане — вирусная трансмиссивная инфекция, периодические вспышки которой сопровождаются абортами, рождением мертвых, недоношенных или имеющих врожденные уродства (артрогрипоз, водянка головного мозга) телят, ягнят и козлят. Вирус болезни Акабане может персистировать как в организме животных, так и in vitro в перевиваемых культурах клеток. Во Всероссийском НИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии была изучена чувствительность перевиваемой культуры клеток почки африканской зеленой мартышки (СV-1) к вирусу болезни Акабане. В этой культуре вирус болезни Акабане вызывал цитопатические изменения, выражающиеся в округлении клеток с цитолизом и отслоением клеточного монослоя через 48 ч после заражения. В представляемой работе впервые показано, что вирус болезни Акабане индуцирует цитоморфологические изменения в первичной диплоидной культуре клеток синовиальной мембраны ягненка, полученной по оригинальной методике, и эта культура пригодна для его накопления в титре, достаточном для проведения исследований и диагностики. Ранее сообщалось, что культура клеток синовиальной мембраны ягненка чувствительна к лентивирусам мелких жвачных: вирусу артрита-энцефалита коз и вирусу Visna Maedi овец. Культуру клеток получали методом выращивания тканевых эксплантатов синовиальной мембраны ягненка. Монослой клеток заражали вирусом болезни Акабане. Цитопатическое действие вируса болезни Акабане регистрировали на 4-е сут после заражения. Оно характеризовалось образованием симпластов, которые за счет слияния инфицированных клеток увеличивались в размере на 5-6-е сут. Активность вируса болезни Акабане штамма В8935 составила 5,0±0,25 lg ТЦД50/см3, штамма Р — 6,0±0,25 lg ТЦД50/см3. До трех пассажей, а также после замораживания первичная культура клеток сохраняла вируспродуцирующую активность, а вирус болезни Акабане — инфекционные свойства. Клетки синовиальной мембраны ягненка можно пересевать повторно при культивировании, а избыток диплоидной культуры, как и перевиваемые клетки, — консервировать замораживанием, восстанавливая по мере необходимости. При этом целесообразно использовать штамм диплоидных клеток синовиальной мембраны ягненка. Еще одно преимущество получаемой самостоятельно первичной культуры клеток синовиальной мембраны ягненка по сравнению с клеточными линиями обезьян в том, что последние служат источником вируса герпеса В.
Ключевые слова: культура клеток синовиальной мембраны ягненка, вирус болезни Акабане, Orthobunyavirus.
PERMISSIVITY OF LAMB SYNOVIAL MEMBRANE CELL CULTURE FOR AKABANE DISEASE VIRUS
E.A. Balashova, E.I. Baryshnickova, V.M. Lyska, O.L. Kolbasova,
A.V. Lunitsin,
D.V. Kolbasov
Presently, due to the variety and diversity of economic and tourist ties of Russia, episodes of accidental or maybe purposeful (i.e., biological terrorism) entry of exotic infectious pathogens including Akabane disease to the Russian Federation should not be excluded. Akabane disease is a viral transmissible infection. Its recurrent outbreaks are characterized by abortions, still or premature births, or malformations (e.g., arthrogryposis and/or hydrocephaly) for calves, lambs and kids. Akabane disease virus can persist both in animal body and in vitro (e.g., in continuous cell lines). A study of the sensitivity of African green monkey kidney cell line to Akabane virus carried out earlier showed that Akabane virus caused definite cytopathic changes resulting in cell rounding followed by cytolysis and detachment of the cell monolayer within 48 hours post infection. In this paper we first reported on the cytomorphological changes caused by Akabane virus in the primary lamb synovial membrane diploid cell culture (LSMCC) prepared according to an earlier developed procedure, and on a suitability of this culture for the virus accumulation in titers sufficient for study and making diagnosis. It has been formerly determined that the lamb synovial membrane cell culture is sensitive to small ruminant lentiviruses like caprine arthritis encephalitis virus or Visna-Maedi virus in sheep. LSMCC was prepared using a method for tissue explant culture. On day 4 post inoculation of the cell monolayer with Akabane virus the cytopathic effect appeared which manifested as formation of symplasts that grew larger due to their fusion on day 5 to 6. The Akabane virus activity was 6.0±0.05 lg TCID50/cm3 for strain V8935, and 5.0±0.05 lg TCID50/cm3 for strain P. As many as three passages and also the primary cell culture (after freezing) kept the virus-producing activity, and the Akabane virus retained its infective properties. The lamb synovial membrane cells can be re-cultured, and excessive diploid culture can be frozen to preserve and thawed as required. It is expedient to use a strain of diploid lamb synovial membrane cells deposited and patented earlier. One more advantage of the primary LSMCC as compared to monkey cell lines is that the latter ones may be a source of simian herpes B virus.
Keywords: lamb synovial membrane cell culture, Akabane disease, Orthobunyavirus.
ГНУ Всероссийский НИИ ветеринарной |
Поступила в редакцию |
Оформление электронного оттиска
