Сельскохозяйственная биология, 2014, № 6, с. 67-72.

УДК 636.2/.3:619:578:57.083

doi: 10.15389/agrobiology.2014.6.67rus

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МЕТОДА ОТ-ПЦР ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ГЕНОМА ВИРУСА БОЛЕЗНИ АКАБАНЕ В ОРГАНАХ И КРОВИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО ЗАРАЖЕННЫХ МОРСКИХ СВИНОК

Е.Г. НИКИТИНА, Н.И. САЛЬНИКОВ, С.А. КАТОРКИН, Е.А. БАЛАШОВА, С.Ж. ЦЫБАНОВ, Д.В. КОЛБАСОВ, А.В. ЛУНИЦИН

Болезнь Акабане — трансмиссивная арбовирусная инфекция крупного и мелкого рогатого скота, вызываемая вирусом серогруппы Simbu семейства Bunyaviridae. Болезнь наносит большой экономический ущерб, причиняемый животноводческой отрасли в результате эпизоотий, поскольку при заболевании происходят прямые потери от гибели животных, снижения продуктивности домашних жвачных животных и нарушения воспроизводительной функции у больных животных. Болезнь протекает в виде эпизоотии, характеризуется географической приуроченностью, выраженной сезонностью (август—октябрь, февраль) и периодичностью возникновения с интервалом в несколько лет. Для накопления вируса Акабане обычно используют 1-2-суточных белых мышей-сосунов, которые представляют собой наиболее чувствительную систему для изоляции всех буньявирусов. Ранее во Всероссийском НИИ ветеринарной вирусологии и микробиологии (ВНИИВиМ) была разработана тест-система для выявления РНК вируса болезни Акабане на основе ОТ-ПЦР в режиме реального времени и подтверждена ее эффективность при обнаружении вируса у экспериментально зараженных мышей и в инфицированных культурах клеток. Однако представляло интерес, с одной стороны, оценить возможности предложенной тест-системы при расширении круга исследуемых объектов, с другой — найти новые модели для изучения и накопления вируса. В настоящей работе мы использовали здоровых морских свинок (n = 20, масса каждая особи — по 400 г). Эксперимент по заражению морских свинок проводили в трех повторностях. Животных заражали концентрированным культуральным материалом, содержащим вирус болезни Акабане (штамм В8935) с инфекционной активностью 7,0 lg ТЦД₅₀/см³. Начиная со 2-х по 6-е сут после заражения, у всех животных ежедневно отбирали пробы крови. В пробах крови от всех морских свинок геном вируса болезни Акабане был обнаружен только на 4-е сут после заражения. Одна особь пала на 1-е сут после заражения (возможно, вследствие неспецифической реакции, так как выявить геном вируса болезни Акабане при исследовании образцов органов, взятых post mortem у этого животного, не удалось). Дополнительно для получения биоматериала на 4-е сут после заражения у нескольких морских свинок были отобраны органы (мозг, легкое, почки, лимфоузел, сердце), в тканях которых также обнаружили вирус Акабане. Этим подтверждается эффективность разработанной тест-системы при диагностике вируса болезни Акабане и возможность использовать для его накопления еще один модельный объект — морских свинок.

Ключевые слова: болезнь Акабане, вирус болезни Акабане, морские свинки, комары Culicoides, ОТ-ПЦР, тест-система.

Полный текст

DETECTION OF AKABANE VIRUS GENOME IN ORGANS AND BLOOD OF EXPERIMENTALLY INFECTED CAVIES

Akabane disease, a transmissible pathology of cattle, sheep and goats, is caused by Simbu serotype virus (Bunyaviridae) and results in significant economical losses due to abortions, unviable and abnormal calves, or dead embryos and calves born. The Akabane disease epizooties, characterized by geographic locations and the coincidence with definite seasons, are widely registered. For preparative accumulation of Akabane virus the 1-2 day mice are used as the most sensitive system for Bunyaviridae isolation. Earlier we reported the development of a test system for Akabane virus RNA indication by real time reverse transcription PCR. Its efficacy was approved using infected mice and cell cultures. Furthermore, it was of interest to estimate this test system with respect to more wide range of model animals to be involved in the study and reproduction of Akabane virus. In this investigation, healthy cavies (n = 20, the animal weight of 400 g) were infected with a concentrated viral culture (B8935 strain) of 7.0 lg lg TCID₅₀/cm³. In blood the Akabane virus RNA was detected in four animals only 4 days after inoculation, but not shown in the rest probes, which were sampled from 2 to 6 days, and one cavy died a day after infection, probably due to nonspecific reaction as the Akabane virus genome was not detected in the post mortem tissue samples of all the organs of the animal tested. After 4 days the Akabane virus RNA was also indicated in brain, lung, kidney, hart and lymphatic gland. Thus, the developed test-system is effective for Akabane disease diagnosis, and the experimentally infected cavies can be the model animals used to study and produce Akabane virus preparations.

Keywords: Akabane disease, Akabane virus, cavies, Culicoides, reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR, test-system.

Оформление электронного оттиска