doi: 10.15389/agrobiology.2016.4.475rus

УДК 636.2:575.174.015.3:578.2:577.2.08:51-76

 

ИНФЕКЦИОННАЯ ОПАСНОСТЬ НОСИТЕЛЕЙ ПРОВИРУСА ВИРУСА
БЫЧЬЕГО ЛЕЙКОЗА И ЕЕ ОЦЕНКА В СВЯЗИ С ЛЕЙКОЦИТОЗОМ

Г.Ю. КОСОВСКИЙ1, В.И. ГЛАЗКО1,2, И.А. АНДРЕЙЧЕНКО1,
С.Н. КОВАЛЬЧУК1, Т.Т. ГЛАЗКО1,2

Распространение вируса бычьего лейкоза (Bovine leukemia virus, BLV) наносит существенный экономический ущерб молочному и мясному скотоводству. Одна из причин заключается в том, что до сих пор не удается разработать оптимальные способы предупреждения заболевания. Ситуация усугубляется отсроченным проявлением лимфолейкоза, который примерно у 5-7 % животных наблюдается через 5-10 лет после инфицирования. Подразделенность инфицированных BLV В-клеток на продуцентов зрелых вирусных частиц и предшественников формирования лимфом приводит к необходимости рассматривать отдельно инфекционную опасность животных и прогноз развития у них лимфолейкоза. Тестирование антител к вирусным антигенам или встройки провирусной ДНК в геном хозяина не позволяет охарактеризовать животных с точки зрения роли в распространении инфекции, что наиболее существенно для ее контроля. Поэтому особую актуальность приобретают методы, позволяющие оценить инфекционную опасность инфицированных особей, связанную с большим числом В-лимфоцитов, способных продуцировать зрелые вирусные частицы. В настоящей работе мы сопоставили содержание вирусной РНК в образцах крови и пролиферативную активность лейкоцитов, чтобы изучить возможность использовать эти показатели для индивидуального тестирования животных по обеим характеристикам. С использованием разработанных нами праймеров к генам BLV gag и pol (Г.Ю. Косовский с соавт., 2013) у черно-пестрых голштинизированных коров (n = 57) из промышленного стада определили наличие или отсутствие провирусной ДНК BLV, интегрированной в геном, и выявили группу инфицированных особей. С помощью RT-PCR (reverse transcription polymerase chain reaction) и праймеров к консервативному фрагменту гена pol BLV оценили относительное количество экспрессирующегося провируса у индивидуальных инфицированных животных. Дополнительно у всех коров, включенных в анализ, подсчитали число лейкоцитов в образцах крови. Инфицированные животные по этому показателю разделились на две подгруппы: у первой значения не превышали 17×109 кл/л, у второй — оказались существенно выше, достигая у некоторых особей 28×109 кл/л. У коров, свободных от инфекции (за исключением одной особи), число лейкоцитов было ниже 12×109 кл/л. Оказалось, что достаточное для выявления в RT-PCR количество РНК вируса BLV обнаруживается только у второй подгруппы инфицированных коров. Повышение количества лейкоцитов (> 20×109 кл/л) в сочетании с накоплением вирусной РНК в образцах крови инфицированных животных свидетельствует о том, что именно они представляют наибольшую инфекционную опасность. Это позволяет предполагать, что совместное использование двух показателей (число лейкоцитов и количество вирусной РНК BLV) может быть достаточно надежным подходом при первоочередных мероприятиях по оздоровлению стад крупного рогатого скота.

Ключевые слова: вирус бычьего лейкоза, BLV, RT-PCR, провирусная ДНК, ген pol, лейкоцитоз, инфекционная опасность.

 

Полный текст

 

THE INFECTION HAZARD OF CARRIERS OF PROVIRAL
BOVINE LEUKEMIA VIRUS AND ITS EVALUATION WITH
REGARD TO LEUKOCYTOSIS

G.Yu. Kosovskii1, V.I. Glazko1,2, I.А. Andreichenko1, S.N. Koval’chuk1,
T.T. Glazko1,2

The spread of the bovine leukemia virus (BLV) brings significant economic damage to dairy and beef cattle still due to the problems to develop the optimal methods for its prevention. The situation is compounded by the fact that the clinical manifestation of lymphocytic leukemia has been observed in animals during 5 to 10 years after infection in approximately 5-7 % of animals. Subdivision of BLV infected B cells on the producers of mature viral particles and precursors of the formation of lymphomas necessitates of separately consideration of the risk of infecting animals and forecast for development of lymphocytic leukemia. Testing antibodies to viral antigens, or proviruse DNA insertion into the host genomes does not allow to reveal the most dangerous animals in view of their role in the infection spread, which is most essential for its control. In this regard, the particular urgency is the method development to assess the infection hazard from carriers of provirus DNA of bovine leukemia virus, associated with a large number of B lymphocytes, producing mature viral particles. In order to evaluate the possibility of using in these purposes not only testing individual animals on the quantity of viral RNA in blood samples, but the proliferative activity of leucocytes, these two characteristics were compared in the present work. The presence or absence of genome integrated provirus DNA in Black-and-White Holstein cows (n = 57, commercial herd) was evaluated and the group of infected animals was revealed when using primers designed by us for BLV gag and pol genes (G.Yu. Kosovoskii et al., 2013). The relative quantity expression of provirus in individual infected cows using RT-PCR analysis and primers to the fragment of the BLV pol gene were assessed. The counting of leukocytes in blood samples of all cows, included in the analysis, was performed. The number of leucocytes in cows free from infection, with the exception of one cow, was less than 12×109 cells/l. This indicator in infected animals divided the investigated cows into two subgroups — in the first subgroup the leucocyte values did not exceed 17×109 cells/l, in the second subgroup the number of leukocytes was significantly higher, reaching 28×109 cells/l in some animals. It was important to note, that the amount (above 20×109 cells/l) of BLV RNA, sufficient to detect by RT-PCR, was revealed only on the second subgroup. The coincidence of the increased leucocyte amount and the BLV RNA in blood of infected animals indicates that particular these cows represent the greatest infection hazard and suggests that the combination of estimates of the number of leukocytes and RNA BLV can be quite a reliable approach for the herd recovery by priority of their liquidation.

Keywords: bovine leukemia virus, BLV, RT-PCR, provirus DNA, pol gene, leukocytosis, the infection hazard.

 

11ФГБНУ Центр экспериментальной эмбриологии
и репродуктивных биотехнологий,

127422 Россия, г. Москва, ул. Костякова, 12, стр. 4,
e-mail: gkosovsky@mail.ru, vigvalery@gmail.com, s.n.kovalchuk@mail.ru, tglazko@rambler.ru;
2ФГБОУ ВПО Российский государственный
аграрный университет—МСХА им. К.А. Тимирязева,

127550 Россия, г. Москва, ул. Тимирязевская, 49

Поступила
в редакцию
21 апреля 2016 года

 

Оформление электронного оттиска

назад в начало