Сельскохозяйственная биология, 2014, № 4, с. 58-63.

УДК 636.4:619:578.835.2:57.083

doi: 10.15389/agrobiology.2014.4.58rus

ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ВЫРАЩИВАНИЯ ВИРУСА АФРИКАНСКОЙ ЧУМЫ СВИНЕЙ В ГЕМОПОЭТИЧЕСКИХ КЛЕТКАХ

Н.И. ЗАКУТСКИЙ, Т.Г. ШИРОКОВА, Н.С. НЕВЕРОВСКАЯ, С.Г. ЮРКОВ

По вопросам технологии получения вируса африканской чумы свиней (АЧС), в частности об используемых методах культивирования, в доступной литературе имеется весьма ограниченное число публикаций. Кроме того, выбор эффективных клеточных систем также лимитирован. Статья посвящена разработке и сравнительной оценке эффективности приемов выращивания вируса африканской чумы свиней (АЧС) в культурах клеток костного мозга (КМС) и лейкоцитов (ЛС) свиней. Показана возможность использования клеточной суспензии, изготовленной из костного мозга свиней после 24 ч хранения при 4-6 °С, для выращивания вируса АЧС. Вирус, полученный в такой клеточной суспензии, не снижал инфекционной активности и накапливался в титрах 7,25-7,50 lg ТЦД₅₀/см³. Изучены условия выращивания вируса АЧС в гемопоэтических клетках с применением стационарных аппаратов типа КАСМ (кассетный аппарат для монослойного культивирования), роллерного способа культивирования в круговом монослое и в суспензии клеток, а также биологических реакторов (ферментеров) для суспензионного культивирования. Во всех вариантах вирус АЧС стабильно накапливался в клетках КМС и ЛС в высоких титрах (7,25-8,00 lg ГАЕ₅₀/см³). Однако наиболее эффективным, технологичным и производительным оказалось выращивание вируса АЧС в суспензии гемопоэтических клеток в автоматизированных реакторах. В этом случае титр вируса достигал 7,50-8,00 lg ГАЕ₅₀/см³. Анализируя результаты исследований, можно сделать вывод, что перечисленные методы в сравнении с накоплением вируса АЧС в стационарной культуре клеток в матрасах более эффективны и могут применяться при крупномасштабном культивировании этого биоагента с целью получения препаратов для вакцинации и диагностики при АЧС.

Ключевые слова: африканская чума свиней, АЧС, вирус АЧС, культура клеток костного мозга свиней, культура клеток лейкоцитов свиней, КМС, ЛС, аппарат для стационарного монослойного культивирования, аппарат КАСМ.

Полный текст

EFFICACY OF VARIOUS METHODS FOR AFRICAN SWINE FEVER VIRUS GROWTH IN HEMATOPOIETIC CELLS

For African swine fever virus (ASFV) reproduction little publications are available, in particular, those concerning cultivation technologies. Moreover, the range of effective cell systems for cultivation is limited too. This report highlights the development and comparative evaluation of methods for African swine fever virus (ASFV) growth in porcine bone marrow cell (PBM) and leukocyte (PL) cultures for their efficacy. We showed the possibility of using cell suspension prepared from porcine bone marrow after its 24-hour storage at 4 to 6 °С for ASFV culture. The virus grown in the PBM cell suspension after the abovementioned storage period for porcine bone marrow had expired did not reduce its infectious activity, and accumulated with titers of 7.25 to 7.50 lg TCID₅₀/cm³. The conditions for ASF virus culture in hematopoietic cells using stationary devices like KASM (a cassette unit for monolayer culture), a technique for roll-bottle culture in a circular monolayer or in a cell suspension, and biological reactors (fermentors) for a suspension culture were analyzed. When using these culture methods, ASF virus steadily accumulated in the PBM or PL cells with high titers ranging from 7.25 to 8.00 lg HAU₅₀/cm³. Nevertheless, ASF virus growth in hematopoietic cell suspensions using automated reactors was found to be the most effective, technologically advanced and productive technique. In this case, the virus titers were as high as 7.50 to 8.00 lg HAU₅₀/cm³. Analyzing the results of the studies we concluded that the above methods were more efficient as compared to ASFV growth in a stationary cell culture using flasks, and could be used for large scale cultivation of this biological agent in vaccinology and diagnostics of African swine fever infection.

Keywords: African swine fever, ASF, ASF virus, porcine bone marrow cell culture, porcine white blood cell culture, porcine bone marrow, porcine white blood cells, cassette unit for stationary monolayer culture.

Оформление электронного оттиска