Сельскохозяйственная биология, 2013, № 4, с. 53-58.

doi: 10.15389/agrobiology.2013.4.53rus

УДК 639.3.09:619:578:616-079.7:577.083.3

НЕПРЯМОЙ ВАРИАНТ ТВЕРДОФАЗНОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКАХ КРОВИ ОСЕТРОВЫХ РЫБ

И.Б. ПРОКАЕВА¹, Б.В. НОВИКОВ²

Герпесвирусная болезнь сибирского осетра (возбудитель — SbSHV) поражает промышленные популяции и наиболее тяжело протекает в условиях индустриального осетроводства. Существенный недостаток общепринятого метода специфической диагностики возбудителя заключается в том, что SbSHV активно репродуцируется in vivo при температуре воды в диапазоне 10-18 °С. Поэтому такой способ выделения вируса может быть применен в основном весной и иногда осенью. В другое время года содержание вируса в тканях рыб снижается настолько, что выявить его становится практически невозможно. Нами разработан метод ретроспективной диагностики герпесвирусной болезни сибирского осетра с применением непрямого варианта твердофазного иммуноферментного анализа. Представлены данные по получению необходимых реагентов для постановки твердофазного иммуноферментного анализа (накопление вируса в культуре клеток, выделение IgМ-подобного иммуноглобулина из осетровых гипериммунных антисывороток и т.д.). Выполнено сравнение эффективности предложенного метода и реакции нейтрализации. Показано, что метод позволяет выявлять антитела как у сибирского осетра, так и у близкородственных видов осетровых рыб или их гибридов.

Ключевые слава: герпесвирус сибирского осетра, иммуноглобулин, твердофазный иммуноферментный анализ, ТФ ИФА, серодиагностика.

Полный текст

INDIRECT ELISA FOR THE DETECTION OF ANTIBODIES IN SERA OF STURGEON FISH SPECIES

Herpesvirus disease of Siberian sturgeon, caused by SbSHV, is especially severe in the industrial populations. The commonly used method for its specific diagnostics has a sufficient disadvantage because of SbSHV active reproduction in vivo when the water temperature is in the range of 10-18 °С, and therefore, can be applied mainly in spring and sometimes in autumn. At other seasons the amount of the virus in the fish tissues reduces so that it becomes nearly unrevealable. We have developed a method for retrospective diagnosis of herpesvirus disease of Siberian sturgeon using indirect ELISA version. Experimental data on ELISA development for the detection of antibodies against Siberian sturgeon herpesvirus are presented. Procedures for preparing the ELISA specific reagents are described, including the virus reproduction in cell culture, isolation of IgM-like immunoglobulin from hyperimmune antisera of sturgeon, etc. The effectiveness of the proposed method and the reaction of neutralization was compared. It is shown, that by elaborated method the SbSHV antibodies can be detected both in the Siberian sturgeon, and among closely related species of sturgeon, or their hybrids.

Keywords: herpesvirus of the Siberian sturgeon, immunoglobulin, ELISA, serodiagnostics.