УДК 636.4:619:616.097.3

ИММУННЫЙ СТАТУС У ПОРОСЯТ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ВРЕМЕНИ И ДОЗЫ ВВЕДЕНИЯ НУКЛЕИНАТА НАТРИЯ ПРИ ВАКЦИНАЦИИ

А.В. КРИВОПУШКИН1, Е.В. КРАПИВИНА1, Ю.Н. ФЕДОРОВ2

В производственных условиях оценивали иммунный статус у поросят породы крупная белая при вакцинации против лептоспироза с использованием природного иммуномодулятора нуклеината натрия. Установлено, что формирование иммунного ответа зависит от дозы препарата и срока его введения. Введение нуклеината натрия до вакцинации и одновременно с вакцинацией против лептоспироза стимулировало более выраженный иммунный ответ.

Ключевые слова: иммунный статус, поросята, вакцинация, лептоспироз, нуклеинат натрия, лимфоциты, антитела, иммуноглобулины.

 

Возрастающий интерес исследователей и практических специалистов к проблеме иммуномодуляции связан с ухудшением экологических условий, возрастающей нагрузкой неблагоприятных факторов, ростом числа иммунозависимых патологий, а также неэффективностью традиционных методов терапии и повышением устойчивости патогенов к лекарственным средствам. В медицине, в том числе ветеринарной, создание препаратов против новых штаммов и типов возбудителей инфекционных болезней нередко отстает от темпов эволюции микроорганизмов (1, 2).

Лептоспироз — один из самых распространенных зооантропонозов, при котором наиболее экономичной и эффективной мерой борьбы считается вакцинация. Эпизоотологические данные указывают на необходимость совершенствования средств специфической профилактики лептоспироза животных (3). Для усиления иммунного ответа на вакцину оправдано применение иммуномодуляторов, в частности нуклеината натрия.

Целью нашей работы было изучение влияния дозы и времени введения нуклеината натрия на иммунологическую реактивность организма поросят при вакцинации против лептоспироза.

Методика. Научно-производственный опыт проводили в СПК агрофирмы «Культура» (Брянский р-н, Брянская обл.). По принципу парных аналогов (с учетом живой массы и происхождения) сформировали три группы поросят крупной белой породы 3-месячного возраста (по 12 гол. в каждой): I группа — контрольная, II и III — опытные. Содержание животных соответствовало ветеринарно-зоогигиеническим требованиям, им скармливали основной рацион, который был составлен с учетом живой массы и сбалансирован по всем компонентам в соответствии с нормами кормления (4). В 3-месячном возрасте поросят вакцинировали поливалентной вакциной ВГНКИ против лептоспироза животных (серогруппы: pomona, icterohaemorrhagiae, tarassovi). Животным из II группы инъецировали 0,2 %раствор нуклеината натрия внутримышечно в дозе 0,04 мл/кг живой массы одновременно с вакцинацией, из III — внутримышечно по 0,01 мл/кг за 8 сут до вакцинации и в день вакцинации. Кровь для исследования брали до утреннего кормления у 5 животных в каждой группе из хвостовой вены за 8 сут до вакцинации, в день вакцинации, а также через 14 и 22 сут после нее.

Число лейкоцитов в крови подсчитывали в камере Горяева, лейкограмму определяли в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе, содержание популяции Т-лимфоцитов (Е-РОЛ, %) — с помощью реакции розеткообразования лимфоцитов с эритроцитами барана, В-лимфоцитов (М-РОЛ, %) — с эритроцитами мыши (5), субпопуляции иммунорегуляторных Т-лимфоцитов, обладающих преимущественно хелперной (Е-РОЛтр, %) и супрессорной (Е-РОЛтч, %) активностью, — в тесте с теофиллином (6). Количество иммуноглобулинов оценивали методом радиальной иммунодиффузии по Манчини (7), специфических антител к лептоспирам серовариантов pomona, icterohaemorrhagiae, tarassovi — в реакции микроагглютинации.

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики. Для выявления статистически значимых различий использован критерий Стьюдента-Фишера по Н.А. Плохинскому (8). В качестве значений физиологической нормы принимали интервалы соответствующих показателей, приведенные в литературе (9-11).

Результаты. Данные, представленные в таблице, свидетельствуют, что cодержание лейкоцитов в крови у поросят всех групп перед началом опыта существенно не различалось и превышало нормативные значения. В следующие периоды исследования значимых различий по числу лейкоцитов крови между животными I, II и III групп не установлено. При этом введение поросятам нуклеината натрия в дозе 0,04 мл/кг при вакцинации обусловило через 22 сут после неe сохранение повышенного содержания лейкоцитов в крови, на что указывает снижение этого показателя у животных I и III групп по сравнению с начальным периодом соответственно на 35,03 и 39,99 % (P < 0,05) при отсутствии существенных изменений у поросят II группы.

Абсолютное содержание лимфоцитов в крови у поросят перед началом опыта либо соответствовало нормативным значениям (II группа), либо несколько превышало их (I и III группы) и существенно не различалось. Через 8 сут число лимфоцитов в крови у поросят I и II групп изменилось незначительно, у животных III — снизилось на 37,45 % (P < 0,05) до нормативных значений. Через 14 сут после вакцинации существенных изменений числа лимфоцитов в крови у животных подопытных групп не отмечали. Через 22 сут по сравнению с предыдущим периодом абсолютное содержание лимфоцитов у поросят III группы снизилось на 27,97 % (P > 0,05), I — на 32,65 % (P < 0,05), у животных II группы — напротив, повысилось на 19,40 % (P > 0,05). Изменения привели к тому, что в этот период у животных II группы абсолютное число лимфоцитов в крови было на 50,54 % выше (P < 0,05), чем у поросят I группы.

Содержание T-лимфоцитов в крови у всех животных перед началом опыта существенно не различалось и соответствовало нижним границам физиологической нормы. Через 8 сут отмечали тенденцию к повышению этого показателя у поросят I и II групп (соответственно на 11,47 и 16,86 %), у животных III группы — достоверное увеличение (на 30,40 %). Через 14 сут после вакцинации по сравнению с предыдущим периодом наблюдали снижение числа Т-лимфоцитов у животных I, II и III групп соответственно на 48,02; 60,02 и 53,74 % (P < 0,05) без существенных различий между группами. Это снижение, видимо, связано с миграцией лимфоцитов в лимфоидные ткани после вакцинации для формирования иммунного ответа. Через 22 сут после вакцинации по сравнению с предыдущим периодом у животных I группы выявили тенденцию к снижению числа Т-лимфоцитов на 16,13 %, у животных II и III групп — к его повышению соответственно на 48,35 и 32,24 %. При этом доля Т-лимфоцитов у поросят III группы была на 48,74 % (P < 0,05) выше, чем у животных I группы.

Число теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов (фракции, обогащенной Т-лимфоцитами, обладающими преимущественно хелперной активностью) в крови у всех животных перед началом опыта существенно не различалось, соответствовало нормативным значениям и не превышало (P > 0,05) числа Т-лимфоцитов, что свидетельствует об отсутствии в крови у животных в этот период малодифференцированных клеток указанной фракции.

Иммунный статус у поросят породы крупная белая при вакцинации против лептоспироза в зависимости от времени и дозы введения нуклеината натрия (M±m, научно-производственный опыт, СПК агрофирмы «Культура», Брянская обл.)

Показатель

Группа
(n = 5)

Перед началом опыта

До вакцинации

После вакцинации

через 14 сут

через 22 сут

Лейкоциты, 109/л

I

29,03±
1,71

23,93±
2,21

25,90±
2,67

18,86±
1,04

II

22,35±
2,65

23,28±
0,89

21,48±
1,98

25,56±
2,87

III

30,16±
2,87

22,17±
2,34

24,11±
1,21

18,10±
2,72

Лимфоциты, 109/л

I

18,15±
1,55

16,20±
1,61

16,63±
1,68

11,20±
0,50

II

14,67±
2,10

16,68±
1,26

14,12±
1,26

16,86±
1,79*

III

22,16±
2,38

13,86±
1,66

15,66±
1,20

11,28±
1,70

Е-РОЛ, %

I

41,75±
1,36

46,54±
5,11

21,70±
6,20

18,20±
2,28

II

41,60±
1,72

48,62±
2,61

16,63±
1,81

24,67±
4,83

III

44,25±
3,26

57,70±
2,54

20,47±
2,41

27,07±
2,11*

Е-РОЛтр, %

I

48,25±
1,46

53,30±
5,57

19,53±
5,92

24,70±
4,42

II

49,60±
4,24

53,73±
3,20

16,50±
2,66

26,40±
4,21

III

50,80±
1,39

58,43±
5,81

6,95±
1,61**

23,93±
3,12

Е-РОЛтч, %

I

0

2,07±
1,39

3,77±
1,24

0

II

0,60±
0,60

0

2,00±
1,46

3,60±
3,60

III

0,40±
0,40

5,80±
3,30

13,52±
3,31*, **

5,33±
3,11

М-РОЛ, %

I

25,00±
1,87

20,33±
1,92

21,77±
2,39

18,47±
1,92

II

28,00±
2,77

24,60±
1,18

15,29±
4,36

9,00±
1,90*

III

23,40±
2,27

28,33±
1,92*

18,57±
2,01

30,93±
2,16*, **

0-лимфоциты, %

I

33,25±
2,96

33,13±
5,73

56,53±
8,42

63,33±
2,14

II

30,40±
3,08

26,78±
3,73

65,58±
5,94

66,33±
3,34

III

30,50±
3,80

13,97±
4,21*

60,97±
3,35

42,00±
2,46*, **

IgM, мг/мл

I

23,20±
1,08

25,50±
0,50

24,06±
1,12

23,52±
0,45

II

24,70±
0,41

23,00±
0,42

25,40±
1,53

23,84±
0,83

III

24,00±
1,79

24,30±
1,14

25,20±
1,55

24,58±
0,80

IgG, мг/мл

I

2,20±
0,08

2,23±
0,06

2,30±
0,13

2,14±
0,02

II

2,21±
0,07

2,20±
0,08

2,34±
0,19

2,78±
0,30

III

2,33±
0,14

2,18±
0,05

2,50±
0,16

2,68±
0,27

СОЭ, мм/час

I

4,40±
1,17

1,62±
0,34

4,70±
0,86

5,30±
1,26

II

3,64±
0,43

1,42±
0,12

6,70±
1,88

4,20±
0,73

III

2,70±
0,20

1,74±
0,10

5,40±
1,78

4,70±
0,97

Титр антител:

 

 

 

 

 

к Leptospira ic-terohaemorrhagiae

I

150,00±
68,92

220,00±
145,43

110,00±
24,49

100,00±
27,39

II

180,00±
64,42

190,00±
5,73

200,00±
0,00*

100,00±
27,39

III

90,00±
78,10

80,00±
0,00

230,00±
73,48

200,00±
0,00*, **

к L. pomona

I

0

0

0

80,00±
80,00

II

0

0

0

20,00±
20,00

III

0

0

0

100,00±
44,72

к L. tarassovi

I

0

0

0

0

II

0

0

0

0

III

0

0

0

0

П р и м е ч а н и е. Е-РОЛ, Е-РОЛтр, Е-РОЛтч, М-РОЛ и 0-лимфоциты — соответственно Т-лимфоциты, теофиллинрезистентные Т-лимфоциты, теофиллинчувствительные Т-лимфоциты, В-лим-фоциты и лимфоциты, не образующие розетки с эритроцитами барана и мыши; СОЭ — скорость оседания эритроцитов. Титры антител приведены в обратных величинах.
* и ** Соответственно P < 0,05 по отношению к животным I группы и P < 0,05 по отношению к животным II группы.

Через 8 сут содержание теофиллинрезистентых Т-лимфоцитов в крови у животных подопытных групп по сравнению с начальным периодом существенно не изменилось. При этом теофиллинчувствительные Т-лимфоциты (фракция, обогащенная Т-супрессорами) у животных всех групп как перед началом опыта, так и через 8 сут практически отсутствовали. Через 14 сут после вакцинации по сравнению с предыдущим периодом у животных I, II и III групп выявили резкое (P < 0,05) снижение числа теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов соответственно на 59,52; 66,73  и 86,32 %. Наибольшее снижение числа этих клеток в крови отмечали у особей III группы, что привело к достоверно более низкому показателю (на 57,88 %), чем во II группе. При этом содержание теофиллинчувствительных Т-лимфоцитов в крови у животных III группы было значительно (P < 0,05) выше, чем у поросят I и II групп (соответственно на 258,62 и 576,00 %) и у животных III группы в начальный период (на 2380,00 %). Известно, что появление Т-супрессоров указывает на начало ограничения антителогенеза для предупреждения избыточности соответствующих антител (12). Через 22 сут после вакцинации число теофиллинрезистентных Т-лимфоцитов в крови у животных по группам существенно не различалось и повышалось по сравнению с предыдущим периодом в I, II и III группах соответственно на 26,47; 60,00 (P > 0,05) и 244,32 % (P < 0,05).

Доля В-лимфоцитов в крови у животных всех групп перед началом опыта существенно не различалась и соответствовала нормативным значениям. Через 8 сут у поросят I и II групп отмечалась тенденция к снижению числа В-лимфоцитов соответственно на 18,68 и 12,14 %, III группы —напротив, к увеличению на 21,07 %. Эти тенденции привели к достоверно более высокому содержанию В-лимфоцитов в крови у животных III группы по сравнению с поросятами I (на 39,35 %). Через 14 сут у животных из I группы наблюдали тенденцию к повышению показателя по сравнению с предыдущим периодом на 7,08 %, из II — к снижению на 37,84 %; у поросят из III группы снижение (на 34,45 %) было достоверно значимым. Следовательно, дробное введение нуклеината натрия обусловило более интенсивный переход В-лимфоцитов в ткани для формирования иммунного ответа на введенные при вакцинации антигены. Через 22 сут после вакцинации у животных из I группы отмечали тенденцию к снижению числа В-лимфоцитов в крови на 15,16 % по сравнению с предыдущим периодом, из II — достоверно значимое снижение на 41,14 %, из III — напротив, повышение числа этих клеток на 66,56 % (P < 0,05). В указанный период число В-лимфоцитов в крови у животных во II группе было ниже, чем в I, на 51,27 % (P < 0,05), в III — выше, чем в I и II, соответственно на 67,46  и 243,67 % (P < 0,05), что может быть обусловлено продолжающейся миграцией В-лимфоцитов из крови в ткани у животных I и II группы и ее завершением у поросят III группы.

Число 0-лимфоцитов, не образующих розетки ни с эритроцитами барана, ни с эритроцитами мыши, в крови у всех животных перед началом опыта существенно не различалось. Через 8 сут содержание лимфоцитов в крови у поросят I группы практически не изменилось, у животных II группы регистрировалась тенденция к снижению показателя на 11,91 %, III группы — его достоверно значимое снижение на 54,20 % по сравнению с началом опыта. При этом содержание 0-лимфоцитов у поросят в III группе было ниже, чем в I, на 57,83 % (P < 0,05). Через 14 сут после вакцинации у животных I, II и III групп было установлено достоверно значимое повышение числа 0-лимфоцитов по сравнению с показателем в начальный период соответственно на 70,02; 115,72 и 99,90 %. Через 22 сут по сравнению с предыдущим периодом этот показатель у животных I и II групп существенно не изменился, III — снизился на 31,11 % (P < 0,05). При этом содержание 0-лимфоцитов в крови у поросят III группы было достоверно ниже, чем у особей из I и II групп (соответственно на 33,68 и 36,68 %).

Концентрация иммуноглобулинов изотипов M и G в крови у животных всех групп в течение эксперимента существенно не различалась и соответствовала нормативным значениям. При этом через 22 сут после вакцинации отмечалась тенденция к повышению показателей по сравнению с контролем по IgG — у поросят III группы (на 4,51 %), по IgM — II и III (соответственно на 29,91 и 25,23 %).

Перед началом опыта в крови у животных подопытных групп были выявлены антитела к лептоспирам серогруппы icterohaemorrhagiae, что указывает на возможный предшествующий контакт поросят с указанным микроорганизмом либо колостральное происхождение этих антител. Существенных различий в значениях обратных титров к Leptospiraictero-haemorrhagiae в крови у поросят подопытных групп перед началом опыта и через 8 сут не обнаружили.
Через 14 сут после вакцинации по сравнению с предыдущим периодом количество специфических антител к L. icterohaemorrhagiae в крови у животных I группы снижалось на 50,00 % (P < 0,05), II — существенно не изменялось, III — имело тенденцию к увеличению на 187,50 %. При этом содержание специфических антител к L. icterohaemorrhagiae в крови у животных во II группе было достоверно выше (на 81,82 %), чем в I. Через 22 сут по сравнению с предыдущим периодом этот показатель у животных I и III групп существенно не изменился, II — снизился на 50,00 % (P < 0,05). В связи с наблюдаемыми процессами концентрация специфических антител к L. icterohaemorrhagiae у животных из III группы в этот период была достоверно выше (на 50,00 %), чем у поросят из I и II.
Специфические антитела к лептоспирам серогруппы pomona в крови у животных подопытных групп в незначительном количестве появились только через 22 сут после вакцинации, к микроорганизмам серогруппы tarassovi— не обнаружились и в этот период.
Скорость оседания эритроцитов (СОЭ) у животных подопытных групп перед началом опыта существенно не различалась и соответствовала нормативным значениям. Через 8 сут после вакцинации отмечали снижение величины СОЭ у поросят I, II и III групп соответственно на 63,18 (P > 0,05), 60,99 и 35,56 % (P < 0,05), что указывает на оптимизацию гомеостаза. Через 14 сут у животных I, II и III групп показатель увеличился по сравнению с таковым в предыдущий период на 190,12; 371,83 (P < 0,05) и 210,34 % (P > 0,05), что представляет собой адекватную  реакцию на введение антигенов. Через 22 сут по сравнению с предыдущим периодом у животных в I группе обнаруживалась тенденция к повышению СОЭ на 12,77 %, во II и III — к снижению соответственно на 37,31 и 12,96 %.

Таким образом, внутримышечное введение 0,2 % раствора нуклеината натрия способствовало повышению иммунного статуса организма у поросят. При этом однократная инъекция препарата в дозе 0,01 мл/кг живой массы через 8 сут обусловила оптимизацию абсолютного содержания лимфоцитов в крови у поросят при увеличении относительного количества Т- и В-лимфоцитов, а также повышение степени дифференцировки лимфоцитов. Дробное введение (по 0,01 мл/кг за 8 сут до вакцинации и одновременно с ней) через 14 сут привело к более выраженному иммунному ответу, что через 22 сут проявилось в более высоком содержании специфических антител к Leptospira icterohaemorrhagiae, увеличении степени дифференцировки лимфоцитов и числа Т- и В-лимфоцитов в крови. В дозе 0,04 мл/кг нуклеинат натрия, введенный однократно при вакцинации, предотвращал угнетение синтеза специфических антител к L. icterohaemorrhagiae через 14 сут после вакцинации и способствовал сохранению высокого абсолютного числа лейкоцитов и лимфоцитов в крови у поросят через 22 сут после нее, но главным образом за счет 0-лимфоцитов.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. С м и р н о в  А.М. Ветеринарная медицина. Состояние и перспективы научных исследований. С.-х. биол., 2004, 4: 9-15.
2. В о р о н и н  Е.С.,  П е т р о в  А.М.,  С е р ы х  М.М. и др. Иммунология /Под ред. Е.С. Воронина. М., 2002.
3. П а н и н  А.Н.,  М а л а х о в  Ю.А.,  С о б о л е в а  Г.Л. и др. Вакцина против лептоспироза животных лиофилизированная. Ветеринария, 2002, 1: 21-24.
4. Нормы и рационы кормления сельскохозяйственных животных. Справ. пос. Изд. перераб. и доп. /Под ред. А.П. Калашникова, В.И. Фисинина, В.В. Щеглова и др. М., 2003.
5. П о н я к и н а  И.Д.,  Л е б е д е в  К.А.,  В а с е н о в и ч  М.И. и др. Способ определения иммунологического состояния организма. А.с. 1090409 (РФ) МКИ3 А 61 К 39/00, ¹ 3429. 198/28-13; заявл. 23.04.82; опубл. 07.05.84. Бюл. ¹ 17.
6. П е т р о в  Р.В.,  Х а и т о в  Р.М.,  П и н е г и н  Б.В. и др. Оценка иммунного статуса человека при массовых обследованиях (Методология и методические рекомендации). М., 1989.
7. Б э м  Э. Простая радиальная иммунодиффузия по Манчини. В сб.: Иммунологические методы. М., 1987: 49-57.
8. П л о х и н с к и й  Н.А. Биометрия. Новосибирск, 1961.
9. Ч у м а ч е н к о  В.Е.,  В ы с о ц к и й  А.М.,  С е р д ю к  Н.А и др. Определение естественной резистентности и обмена веществ у сельскохозяйственных животных. Киев, 1990.
10. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: справочник /Под ред. И.П. Кондрахина. М., 2004.
11. T i z a r d  I.R. Veterinary immunology. An introduction. 6th Ed.,  Рhiladelphia, London, Toronto, Montreal, Sydney, Tokyo, 2000.
12. П о л  У.,  С и л ь в е р с т а й н  А.,  К у п е р  М. и др. Иммунология. Т. 1. (Пер. с англ.) /Под ред. У. Пола. М., 1987.

 

IMMUNE STATUS IN PIGLETS IN CONNECTION WITH TIME AND DOSE OF INJECTION OF SODIUM NUCLEINATE DURING VACCINATION

A.V. Krivopushkin1, E.V. Krapivina1, Yu.N. Fedorov2

In industrial conditions the authors estimated the immune status in piglets of the White Large breed during vaccination against leptospirosis with application of nature immunomodulating activity of sodium nucleinate. It was shown, that a forming of immune response depends on the dose of medication and the time of its injection. The injection of sodium nucleinate before vaccination against leptospirosis or at the same time stimulates more pronounced immune response.

Key words: immune response, pigs, vaccination, leptospirosis, sodium nucleinate, antibodies, lymphocytes, immunoglobulins.

 

1ФГОУ ВПО Брянская государственная сельскохозяйственная академия,
243365 Брянская обл., Выгоничский р-н, с. Кокино,
e-mail:cit@bgsha.bryansk.ru
2ГНУ Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности Россельхозакадемии,
141142 Московская обл., Щелковский р-н, п/о Кашинцево, пос. Биокомбината,
e-mail: vnitibp@mail.ru

Поступила в редакцию
5 мая 2009 года

 

 

 

 

 

 

 

 

Оформление электронного оттиска

назад в начало