УДК 636.4:619:591.8

МИКРОБНАЯ КОНТАМИНАЦИЯ И МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛИМФОИДНОЙ ТКАНИ СТЕНКИ ПРЕПУЦИЯ У ХРЯКОВ-ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ В РАЗНЫЕ ВОЗРАСТНЫЕ ПЕРИОДЫ

А.В. ФИЛАТОВ, Н.А. СУНЦОВА

У хряков-производителей крупой белой породы изучали санитарные показатели препуциальной полости и эякулятов. На гистологических срезах стенки препуция определяли толщину прослойки диффузной лимфоидной ткани, размер и число лимфоидных узелков, долю клеток лимфоидного ряда. Оценивали функциональное состояние лимфоидной ткани стенки препуция и ее возрастную инволюцию.

Ключевые слова: микробная контаминация, хряки-производители, лимфоидная ткань.

 

В естественных условиях у здоровых производителей в извитых канальцах, семеннике, придатках, спермопроводах и начальной части уретры микроорганизмы отсутствуют. Они попадают в сперму из окружающей среды, воздуха помещений, препуциального мешка с дивертикулом, кожного покрова, инструментов и посуды, используемой при разбавлении и фасовке спермы, а также с искусственными средами, применяемыми для ее разбавления (1-3). Микробная контаминация спермы во многом определяет ее сохранность, оплодотворяющую способность, величину и качество приплода. При хранении загрязненной микроорганизмами спермы отмечается снижение абсолютного показателя переживаемости спермиев, уменьшение оплодотворяемости свиноматок на 10,4-27,0 %, многоплодия — на 3,1-14,6 %, увеличение числа слабых и мертворожденных поросят в помете соответственно в 4,0 и 2,9 раза (4-7). Инфицированность эякулятов очень часто зависит от микробной загрязненности препуциальной полости и дивертикула хряков-производителей (8-11). Индикатором степени контаминации может служить состояние лимфоидной ткани стенки препуция, входящей в единую иммунную систему организма.

Цель нашей работы — охарактеризовать морфологические особенности лимфоидной ткани стенки препуция у хряков-производителей в связи с микробной контаминацией препуциальной полости и спермы.

Методика. Санитарные показатели препуциальной полости и эякулятов изучали у 12 хряков-производителей крупной белой породы, содержащихся в одинаковых условиях на свиноводческом предприятии ЗАО «Заречье» (Кировская обл.). Смывы из полости препуция получали по методике А.Н. Варнавского (4) в авторской модификации, микробную контаминации смыва из препуция и спермы оценивали при посеве на мясопептонный агар (МПА), коли-титр — на среде Эндо.

Лимфоидную ткань препуциальной полости хряков изучали в трех возрастных группах — до 2 (n = 9), от 2 до 3 (n = 7) и старше 3 (n = 6) лет  в проксимальном, среднем и дистальном отделах висцерального листка и узкой части париетального листка препуция, а также в широкой части париетального листка и в дивертикуле. Висцеральный листок препуция отделяли от головки полового члена, париетальный листок и дивертикул — от окружающей ткани.

Из образцов ткани препуция и дивертикула по методу T. Hellman (12) готовили препараты, которые просматривали в отраженном и проходящем свете. В стенке препуция и дивертикула выявляли одиночные и образующие скопления лимфоидные узелки, определяли их плотность на 1 см2 поверхности стенки и общее число, особенности топографии. Материал фиксировали в 10 % нейтральном формалине и жидкости Толесницки (1), заливали в парафин по общепринятой методике и микротомировали (толщина срезов — 4-5 мкм). Гистосрезы окрашивали гематоксилином Гарриса и эозином, а также метиловым зеленым с дополнительным окрашиванием пиронином по П.Г. Унна. Клеточный состав изучали в функционально активных зонах лимфоидных узелков — герминативном центре и куполе, а также в диффузной лимфоидной ткани. Клетки подсчитывали, используя микроскоп МБИ-3У42 (Россия) со специализированной усовершенствованной сеткой С.Б. Стефанова (13-15) и идентифицировали по Г.С. Катинасу (16).

Результаты. Микробиологические исследования эякулятов и смывов из препуция хряков-производителей показали, что контаминация препуциальной полости и спермы зависит от возраста самцов, причем имеется положительная корреляция по микробному числу (r = 0,15) и коли-титру (r = 0,42; P < 0,01) (табл. 1).

1. Показатели микробной контаминации препуциальной полости и эякулятов в зависимости от возраста хряков-производителей породы крупная белая (Х±х, ЗАО «Заречье», Кировская обл.)

Возраст

Смыв из препуциальной полости

Сперма

микробное число

коли-индекс

коли-титр

микробное число

коли-индекс

коли-титр

До 2 лет

29,7±
9,0

62,0±
20,5

0,0161

2645,0±
433,0

10,8±
2,4

0,0920

От 2 до 3 лет

64,7±
31,7

128,5±
61,4

0,0078

3862,0±
1285,0

20,7±
9,4

0,0490

Старше 3 лет

145,7±
38,1*

198,7±
46,2*

0,0050*

5516,0±
2291,0

40,1±
12,5*

0,0250*

*P < 0,05 (по отношению к возрасту до 2 лет).

Площадь поверхности препуция и дивертикула увеличивалась с возрастом производителей (табл. 2). В стенке препуциальной полости и дивертикула выявили хорошо развитую лимфоидную ткань, в стенке широкой части препуция — одиночные лимфоидные узелки, а у 53 % исследованных животных — также их скопления. Одиночные лимфоидные узелки имели округлую форму и размер менее 0,05x0,05 см. Их плотность на 1 см2 поверхности стенки препуция варьировала от 19,0 до 38,3 шт., общее число у хряков в возрасте до 2 лет равнялось 305,5±33,1, от 2 до 3 — 324,0±30,2 и старше 3 лет — 357,5±55,2 шт.
Скопления лимфоидных узелков округлой формы с неровными краями обнаружили на выступающих в препуциальную полость складках. В основном они находились на границе широкой и узкой частей препуция. Такое расположение лимфоидной ткани стенки позволяет защищать от микробной контаминации узкую часть полости, где в спокойном состоянии расположен половой член.

Во всех возрастных группах у животных количественно преобладали лимфоидные бляшки с 3-4 лимфоидными узелками. Число лимфоидных бляшек, их площадь и общее число лимфоидных узелков в лимфоидных бляшках с возрастом снижались (см. табл. 2).

В стенке париетального листка узкой части препуция одиночные лимфоидные узелки округлой формы размещались равномерно и несимметрично по отношению к шву. В стенке дистального отдела этой части препуция большинство лимфоидных узелков имело площадь 0,01-0,04 см2, среднего и проксимального — 0,01 см2. В дистальном и среднем отделах узкой части париетального листка лимфоидные узелки выступали над поверхностью препуция, в проксимальном — были менее рельефными. Наибольшее число лимфоидных узелков обнаружили у хряков в возрасте от 2 до 3 лет (1594,39±143,56 шт.), наименьшее — у особей старше 3 лет (то есть происходила возрастная инволюция). Плотность лимфоидных узелков на 1 см2 поверхности у хряков в возрасте от 2 до 3 лет также превышала аналогичный показатель в возрастных группах до 2 и старше 3 лет.

2. Площадь морфологических элементов препуция и дивертикула, а также морфометрические показатели лимфоидных бляшек в стенке препуция в зависимости от возраста хряков-производителей породы крупная белая (Х±х, ЗАО «Заречье», Кировская обл.)

Элемент, показатель

До 2 лет

От 2 до 3 лет

Старше 3 лет

П л о щ а д ь   м о р ф о л о г и ч е с к и х   э л е м е н т о в,   см2

Широкая часть препуция

12,27±1,79

12,00±1,85

12,76±1,14

Париетальный листок узкой части препуция

74,36±1,34

79,90±1,49*

81,39±2,22****

Висцеральный листок узкой части препуция

57,21±1,77

59,63±1,23

65,45±2,92****

Дивертикул

122,29±6,65

162,57±10,79**

260,25±57,45*

Препуций + дивертикул

267,42±9,12

324,78±15,42**

350,60±10,11***

М о р ф о м е т р и ч е с к и е   п о к а з а т е л и   л и м ф о и д н ы х   б л я ш е к

Число лимфоидных бляшек, шт.

21,3±2,7

14,0±1,2*

11,0±0,9**, ****

Площадь лимфоидных бляшек, см2:   

 

 

 

   общая

0,900±0,100

0,700±0,100

  0,500±0,020**

   средняя

0,040±0,005

0,010±0,001

0,036±0,010

Число лимфоидных узелков в лимфоидных бляшках, шт.:

 

 

   общее

122,5±9,2

100,6±2,6*

81,0±1,6***, ****

   среднее

5,3±0,6

3,5±0,2*

4,4±0,8

Расстояние между лимфоидными бляшками, см

0,8±0,1

0,6±0,2

0,9±0,1

*, **, *** и **** Соответственно P < 0,05; P < 0,01 и P < 0,001 (по отношению к хрякам до 2 лет); P < 0,05-0,001 (по отношению к хрякам в возрасте от 2 до 3 лет).

На границе париетального и висцерального листков отмечалось  скопление одиночных лимфоидных узелков (со стороны париетального листка — 39-53, висцерального — 23-45 шт.), что также защищает этот участок от попавших в полость препуция микробных агентов.

В стенке висцерального листка выявили только одиночные лимфоидные узелки, которые выступали над поверхностью, придавая ей бугристость. Как правило, в стенке проксимального и среднего отделов их наибольшее число располагалось у шва головки полового члена, наименьшее — на его дорсальной поверхности. Вероятно, это связано с наибольшим контактом шва головки полового члена с микробными агентами. У хряков до 2 лет у шва на 1 см2 поверхности стенки и дорсальной поверхности число одиночных лимфоидных узелков равнялось соответственно 16,5±1,3 и 13,3±1,7; у 2-3-летних самцов — соответственно 17,1±2,1 и 11,1±2,1; у особей старше 3 лет — 14,9±1,5 и 17,7±4,0 шт.  

В дистальный отдел висцерального листка входит гребень головки полового члена, лишенный лимфоидных узелков. Наиболее мелкие лимфоидные узелки располагались на вогнутой поверхности слева от гребня головки полового члена, более крупные — на выпуклой поверхности справа. Слева от гребня одиночные лимфоидные узелки встречались до отверстия мочеполового канала, справа распределялись более равномерно. У хряков всех возрастных групп их размер слева от гребня варьировал от 0,0025 до 0,0100, справа встречались узелки размером от 0,0100 до 0,0225 см2. Плотность одиночных лимфоидных узелков слева от гребня головки была выше, чем справа: на 27,9 — у хряков до 2 лет, на 21,9 — с 2 до 3 и на 16,7 % — старше 3 лет. На вершине головки полового члена с возрастом уменьшалось число одиночных лимфоидных узелков на 1 см2 площади стенки: слева — на 38,4 % (P < 0,001; с 28,20±1,80 до 17,40±2,60 шт.), справа — на 28,7 % (P < 0,05; с 20,33±1,92 до 14,50±1,86 шт.).

С возрастом в стенке висцерального листка происходило снижение общего числа одиночных лимфоидных узелков с 1026,57±26,53 (у хряков до 2 лет) до 919,31±26,36 шт. (особи старше 3 лет).

В стенке дивертикула, как и в широкой части препуция, равномерно распределялись мелкие одиночные лимфоидные узелки (до 0,05½0,05 см). Их число на 1 см2 поверхности варьировало от 20,0 до 35,4 шт. Общее число одиночных лимфоидных узелков увеличилось с возрастанием площади дивертикула. Так, если у хряков до 2-летнего возраста оно составляло 3378,60±287,64 шт., то у особей старше 3 лет их было почти в 1,5 раза больше — 5717,00±653,98 шт. (P < 0,01).

Гистологические исследования показали, что под эпителиальной пластинкой препуция и дивертикула находится неоформленная и оформленная лимфоидная ткань.

В основном лимфоидные узелки выявлялись около кровеносных сосудов, что, возможно, свидетельствует о миграции клеток в стенку препуция из других органов. Четкое подразделение на зоны купола и герминативного центра отмечалось у лимфоидных узелков только в дистальном отделе узкой части париетального листка и в проксимальном отделе висцерального листка. Наибольший размер лимфоидных узелков был у хряков до 2 летнего возраста (до 130½130 мкм), в группе старше 3 лет он  уменьшался (до 18-23 мкм).

По всей стенке препуция и дивертикула обнаруживались препуциальные железы. Выводные протоки желез служат местом эвакуации в препуциальную полость лимфоцитов и других клеток лимфоидного ряда, например плазмоцитов. С возрастом наблюдалась тенденция к увеличению числа желез в поле зрения (в среднем с 3 до 9 шт.), однако число лимфоидных клеток в выводных протоках снижалось.

Диффузная лимфоидная ткань париетального листка стенки препуция (А) и лимфоидные узелки висцерального листка стенки препуция (Б) у хряков-производителей породы крупная белая в разные возрастные периоды: а, б, в — соответственно до 2 лет, от 2 до 3 лет, старше 3 лет.

Толщина слоя диффузной лимфоидной ткани в зависимости от участка препуция и возраста животного изменялась от 7,8 до 130,0 мкм. Наибольшую толщину  слоя зафиксировали на границах между широкой и узкой частями, а также париетальным и ви-сцеральным листками узкой части препуция. С возрастом у животных толщина слоя лимфоидной ткани и число клеток лимфоидного ряда на единицу площади снижались (рис.). Так, у особей старше 3 лет это число уменьшалось в 2-10 раз (в среднем показатель варьировал от 0,8 до 42,7 клеток в поле зрения). Клеточный пул диффузной и оформленной лимфоидной ткани был представлен в основном лимфоцитами, ретикулярными клетками, наблюдались плазмо- и иммунобласты (до 1,0 %), единичные макрофаги и тучные клетки. Доля плазматических клеток в неоформленной лимфоидной ткани на некоторых участках достигала 59,0 %. В герминативных центрах лимфоидных узелков выявлялись клетки в состоянии митоза.

На месте некоторых лимфоидных узелков обнаруживались только циркулярно расположенные клетки ретикулярной и соединительной ткани (до 98,5 %) при незначительной доле лимфоцитов (до 1,5 %).

В лимфоидных узелках стенки препуция с возрастом достоверно снижалась доля клеток лимфоидного ряда (в среднем на 38,1 %, P < 0,01) и возрастала — ретикулярных (в среднем на 37,6 %, P < 0,01) (см. рис.).

При изучении клеточного состава диффузной и оформленной лимфоидной ткани в связи с микробной контаминацией в большинстве случаев отмечалась высокая положительная корреляция последней с числом ретикулярных клеток (r = +0,6-0,9) и отрицательная — с числом лимфоцитов (r = -0,6-0,9).

Таким образом, у хряков-производителей лимфоидная ткань стенки препуциальной полости выполняет функции защитного барьера и препятствует микробной контаминации полости и эякулятов. Эта ткань подвержена возрастной инволюции, которая проявляется в снижении числа и размеров одиночных и формирующих скопления лимфоидных узелков, уменьшении толщины прослойки диффузной лимфоидной ткани, доли клеток лимфоидного ряда и увеличении доли клеток соединительной ткани.

Л И Т Е Р А Т У Р А

1. С т у д е н ц о в  А.П.,  Ш и п и л о в  В.С.,  С у б б о т и н а  Л.Г. и др. Ветеринарное акушерство и гинекология. М., 1986.
2. М о л н а р  Е. Общая сперматология. Будапешт, 1969.
3. И в а н о в  В.С. Совершенствование способа асептического взятия и обработки спермы хряков. Автореф. канд. дис. Харьков, 1981.
4. В а р н а в с к и й  А.Н. Техника взятия смывов из препуция. Ветеринария, 1971, 7: 102-103.
5. О с е т р о в  А.,  Н о в и к о в  В. Профилактика микробной загрязненности. Свиноводство, 1983, 2: 19-20.
6. П р у ц а к о в  В.С.,  В а с и л ь е в  А.К.,  Б о л о ц к и й  И.А. и др. Псевдомонос свиней в Краснодарском крае. Ветеринария, 2002, 12: 12-14.
7. Ф и л а т о в  А.В. Научные основы и практические методы применения озона и биологически активных веществ для повышения воспроизводительной способности свиноматок и хряков-производителей. Автореф. докт. дис. Саратов, 2005.
8. Б е л и к о в  А.А. Микробная контаминация спермы хряков. Повышение эффективности ведения свиноводства. Сб. докл. и тез., посвященных 95-летию со дня рождения академика В.К. Милованова. Быково, 1999: 200-203.
9. С а х н о  В.Ф.,  С и н я е в а  А.А. Предупреждение бактериальной загрязненности семени хряка. Животноводство, 1962, 3: 79-80.
10. С е р д ю к  С.И.,  В е л и ч к о  И.М  Антибиотики обеззараживают сперму. Свиноводство, 1970, 7: 7-9.
11. K o z u m p l i k  J.  Vliw urovne hygieny osetrovani plemeniku a techniky odberu semene na poctu zaradku v ejakulatu Scance. Veter. Med. (CSSR), 1975, 20(9): 516-525.
12. H e l l m a n  T. Studien uber das lymphoide Gewebe. Lehres. Konstitutionsforschung, 1921: 191-219.
13. С т е ф а н о в  С.Б. Морфологическая сетка случайного шага как средство ускоренного измерения элементов морфогенеза. Цитология, 1974, 14(6): 785-787.
14. С т е ф а н о в  С.Б. Визуальная классификация при комплексном сравнении изображений. Архив анат., гистол. и эмбриол., 1985, 88(2): 78-83.
15. С т е ф а н о в  С.Б.,  К у и н о в а  М.К. Методы оценки клеточного состава лимфоидных узелков. Архив анатомии, гистологии и эмбриологии, 1988, 95(8): 85-89.
16. К а т и н а с  Г.С.,  Л е ш к о  О.Г.,  Б а ж е н о в а  И.А. Динамика количества клеток лимфоидного ряда в паракортикальной зоне лимфоидных узелков у мышей С/57. В сб.: Временная и пространственная организация тканей. Л., 1981: 47-54.

 

MICROBIAL CONTAMINATION AND MORPHOLOGICAL CHARACTERISTIC OF LYMPHOID TISSUE OF PREPUTIAL WALL IN BOARS-PRODUCERS AT THE DIFFERENT AGE PERIODS

A.V. Filatov, N.A. Suntsova

The sanitary parameters of preputial cavity and ejaculats were studied in boars-producers of the Large White breed. On histological section of preputial wall the authors determined the layer thickness of diffusive lymphoid tissue, the size and the number of lymphoid nodules, the part of cells of lymphoid series. The functional state of lymphoid tissue of preputial wall and its age involution was also estimated.

Key words: microbe contamination, bores, lymphoid tissue.

 

ФГОУ ВПО Вятская государственная
сельскохозяйственная академия,

610017 г. Киров, Октябрьский просп., 133,
e-mail: fav6819@yandex.ru

Поступила в редакцию
12 февраля 2007 года

 

 

 

 

Оформление электронного оттиска

назад в начало