doi: 10.15389/agrobiology.2021.2.374rus
УДК 633.1:577.15
Исследования проведены за счет средств субсидии на выполнение государственного задания в рамках Программы Фундаментальных научных исследований государственных академий наук (тема № 0529-2019-0066).
КОНВЕРСИЯ ПОЛИМЕРОВ ЗЕРНА ПШЕНИЦЫ И КУКУРУЗЫ ПОД ВЛИЯНИЕМ ФИТОЛИТИЧЕСКИХ И ПРОТЕОЛИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ
Л.В. РИМАРЕВА, М.Б. ОВЕРЧЕНКО, Е.М. СЕРБА ✉, Н.И. ИГНАТОВА,
Н.В. ШЕЛЕХОВА
В состав зерна, помимо крахмала, гемицеллюлоз и белка, входят фитиновая кислота и ее соли. Показано, что фитазы способствуют высвобождению фосфора, улучшению переваримости питательных веществ кормов, повышению мясной продуктивности животных и птицы. В то же время мало изучено каталитическое действие фитаз и протеаз на степень деструкции полисахаридов и белковых полимеров зернового сырья, высвобождение катионов и анионов, особенно при приготовлении зернового сусла в производстве спирта. В представленной работе мы впервые показали, что в результате фитолитического действия в зерновом сусле происходит не только высвобождение фосфатов и катионов металлов, но и увеличение концентрации анионов органических солей. Совместное действие фитолитических и протеолитических ферментов на полимеры зернового сырья повышает степень их каталитической деструкции с образованием растворимых форм углеводов, азотистых веществ, катионов и анионов, способствует получению обогащенного зернового сусла с хорошими реологическими свойствами. Целью работы была оценка эффективности влияния ферментных препаратов фитолитического и протеолитического действия на конверсию высокомолекулярных полимеров пшеничного и кукурузного сырья в процессе приготовления зернового сусла. Объектами исследования служили зерно пшеницы (Triticum sp.) и кукурузы (Zea mays). Зерновое сусло готовили в колбах Эрленмейера, содержащих 50 г зерновой муки и 150 см3 воды и помещенных в водяную баню. На стадии приготовления зернового замеса для декстринизации крахмала применяли термостабильную α-амилазу из расчета 0,6 ед. АС/г крахмала. Для получения зернового сусла осахаривание крахмала и гидролиз некрахмальных полисахаридов в контроле осуществляли ферментными препаратами — источниками глюкоамилазы (9,0 ед. ГлС/г крахмала) и ксиланазы (0,15 ед. КС/г сырья). В опытных вариантах вводили ферментный препарат, содержащий фитазу (от 1,0 до 2,5 ед. ФС/г сырья), а также ФП протеолитического действия (0,1 ед. ПС/г сырья). Состав основных полимеров зернового сырья, концентрацию зернового сусла, содержание редуцирующих углеводов (РВ) определяли согласно инструкции технохимического контроля спиртового производства, концентрацию аминного азота (NH2+) — методом, основанным на способности аминокислот образовывать растворимые медные соединения с суспензией фосфорнокислой меди. Динамическую вязкость зернового сусла оценивали посредством вибрационной вискозиметрии. Изучение ионного состава зернового замеса и сусла проводили, используя систему капиллярного электрофореза серии PrinCE-560 («PrinCE Technologies B.V.», Нидерланды), оснащенную кондуктометрическим детектором. Установлено, что использование фитолитических ферментов способствовало снижению вязкости пшеничного и кукурузного сусла более чем на 20 %, увеличению количества редуцирующих углеводов — на 9,5-11,3 %, повышению количества высвобождаемых ионов — в 2,1-2,4 раза. Содержание аминного азота в сусле существенно не изменялось. Показано, что в результате фитолитического действия повышалась концентрация анионов органических солей, таких как оксалаты, малаты, цитраты и сукцинаты в пшеничном сусле и оксалаты, малаты, цитраты и лактаты в кукурузном сусле. Выявлено более существенное влияние фитазы при подготовке сусла из кукурузы: концентрация фосфатов в питательной среде увеличилась в 3,9 раза (в пшеничном сусле — в 1,6 раза), ионов калия и магния — на 12 и 22 % по сравнению с аналогичными показателями в контроле. Подобрана оптимальная дозировка фитазы (1,5 ед/г сырья), обеспечивающая максимальное высвобождение ионов, идентифицированных методом капиллярного электрофореза, и эффективную конверсию полисахаридов, белковых и фитиновых веществ зерна. Биокаталитическая обработка зерна комплексом ферментов, который наряду с амилазами и ксиланазой включал фитазу и протеазы, способствовала повышению в пшеничном и кукурузном сусле концентрации редуцирующих углеводов на 16,8 и 18,8 %, аминного азота — в 1,7 и 1,9 раза, снижению вязкости — на 41,7 и 44,7 %.
Ключевые слова: фитаза, протеаза, пшеничное и кукурузное сырье, биокатализ, ионы, катионы, фосфор, зерновое сусло.
INFLUENCE OF PHYTOLYTIC AND PROTEOLYTIC ENZYMES ON CONVERSION OF WHEAT AND CORN GRAIN POLYMER
L.V. Rimareva, M.B. Overchenko, E.M. Serba ✉, N.I. Ignatova,
N.V. Shelekhova
Grain, in addition to starch, hemicelluloses and protein, is known to be phytic acid and its salts. It has been shown that the use of phytolytic enzymes promotes the release of phosphorus, improves the digestibility of feed nutrients and increases the meat productivity of livestock and poultry. However, the catalytic effect of phytases and their combinations with proteases on degradation of polysaccharides and protein polymers in grain raw materials, on the release of cations and anions, especially in grain wort for the production of alcohol, has been little studied. This work shows for the first time that phytolytic enzymes improve qualitative estimates, rheological properties and change the ionic composition of grain wort by not only releasing phosphates and metal cations, but also by increasing the concentration of organic salt anions. The combined action of phytolytic and proteolytic enzymes on polymers of grain raw materials provides their catalytic degradation to soluble carbohydrates, nitrogenous substances, cations and anions to produce the enriched grain wort. This work aimed to assess the degree of phytolytic and proteolytic conversion of high-molecular-weight polymers in grain wort. For grain wort, 50 g portions of wheat (Triticum sp.) or corn (Zea mays) grain flour put into Erlenmeyer flasks were added with 150 cm3 of water and incubated in a water bath. At grain batching for starch dextrinization, a thermo-stable a-amylase was added (0.6 units/g starch). For starch conversion to sugars and hydrolysis of non-starch polysaccharides in the control, we used glucoamylase (9.0 units/g starch) and xylanase (0.15 units/g raw material). Phytase (from 1.0 to 2.5 units/g raw material) and a proteolytic enzyme preparation (0.1 units/g raw material) were also added. The control was added neither with phytase, nor the proteolytic enzyme. The profiles of the main polymers of grain raw materials, the grain wort concentration, the content of reducing carbohydrates (RС) were determined according to the techno-chemical instructions for the control of alcohol production, the amine nitrogen (NH2+) concentration was measured by a method based on the ability of amino acids to form soluble copper compounds with a suspension of copper phosphate. The dynamic viscosity of the grain wort was evaluated by vibrational viscometry. The study of the ionic composition of the grain mix and wort was carried out using a PrinCE-560 series capillary electrophoresis system (PrinCE Technologies B.V., Netherlands) equipped with a conductometric detector. The optimal dosage of phytase was 1.5 units/g raw material which ensures the maximum release of ions identified by capillary electrophoresis and the effective conversion of polysaccharides, protein and phytin substances of the grain. It was found that the phytolytic enzymes contributed to a decrease in the viscosity of wheat and corn wort of more than 20 %, a 9.5-11.3 % increase in the concentration of reducing carbohydrates, and a 2.1-2.4-fold increase in the concentrations of released ions. The concentration of amino nitrogen in the wort did not change significantly. It was shown that as a result of the phytolytic action, the concentration of not only metal phosphates and cations, but also anions of organic salts, such as oxalates, malates, citrates, and succinates (in wheat wort) and oxalates, malates, citrates, and lactates (in corn wort) increased. A more significant effect of phytase for corn wort was revealed: the concentration of phosphates in the nutrient medium increased 3.9 times vs. 1.6 times for wheat wort, the levels of potassium and magnesium ions were 12 % and 22 % higher, respectively, as compared to the control in which the phytase was not used. The optimal composition of the enzyme complex is proposed which ensures the effective hydrolysis of polysaccharides, phytin and protein substances of processed raw materials. The synergistic effect of phytolytic and proteolytic enzymes enhances the catalytic hydrolysis of high molecular weight polymers of plant origin and enriches the grain wort with carbohydrates, nitrogenous substances, phosphates, and minerals in bioavailable form. Biocatalytic treatment of grain with the developed enzyme complex which, along with amylases and xylanase, contains phytase and proteases, provides a 16.8 % and 18.8 % increase in the concentration of reducing carbohydrates in wheat and corn wort, a 1.7- and 1.9-fold increase in amine nitrogen and a decrease in wort viscosity by 41.7 % and 44.7 %, respectively.
Keywords: phytase, protease, wheat raw material, corn raw material, biocatalysis, ions, cations, phosphorus, grain wort.
Всероссийский НИИ пищевой биотехнологии – |
Поступила в редакцию |
