doi: 10.15389/agrobiology.2013.2.46rus
УДК 636.2:576.315.086.862:591.39
ОПТИМИЗАЦИЯ ПАРАМЕТРОВ ЭНУКЛЕАЦИИ И СЛИЯНИЯ ООЦИТА С СОМАТИЧЕСКОЙ КЛЕТКОЙ ПРИ ПОЛУЧЕНИИ КЛОНИРОВАННЫХ ЭМБРИОНОВ МЛЕКОПИТАЮЩИХ
Г.Н. СИНГИНА1, А.В. ЛОПУХОВ1, Н.А. ЗИНОВЬЕВА1, Е.В. ШАПКАНОВА2, А.А. ПУЗИК3
Установлено, что эффективность электрослияния зависит от напряжения, продолжительности и кратности импульса. Определены оптимальные параметры электрослияния для мультипоратора (фирма «Eppendorf», : два последовательных импульса постоянного электри-чекого поля с напряжением 30 В продолжительностью 15 мкс, которым предшествует импульс переменного электрического поля с напряжением 5 В продолжительностью 10 с. Установлено, что при «слепом» методе энуклеации первое полярное тельце, служащее ориентиром расположения хромосом, не должно отклоняться от места их локализации более чем на 10°.
Ключевые слова: культивирование in vitro, ооцит, пересадка ядер соматических клеток крупного рогатого скота, электрослияние, энуклеация.
Полный текст
G.N. Singina1, A.V. Lopukhov1, N.A. Zinovieva1, E.V. Shapkanova2, A.A. Puzik3
Parameters of the oocyte enucleation and fusion with somatic cell for producing of cattle cloned cetohybrids were studied. It was established that the electrofusion efficiency depends on strength, duration and set number of electrical pulse. The optimal parameters for Multiporator (Eppendorf, Germany) were determined: two consistent pulses DC electrical field each of 30 V field strength and 15 msec duration followed by the pulse of AC electrical field of 5 V and 10 sec duration. It was found that the first polar body serving as a marker for the chromosome position at «blind» enucleation must not deviate from the chromosome location by more than 10 degrees.
Keywords: in vitro culture, oocyte, cattle nuclear transfer, electrofusion, enucleation.
1ГНУ Всероссийский НИИ животноводства |
Поступила в редакцию |
Оформление электронного оттиска
